一、培養(yǎng)基概述
1.定義
培養(yǎng)基是指由人工配制而成的，適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的，微生物培養(yǎng)、分離、鑒別、研究和保存用的混合營養(yǎng)基質(zhì)。微生物的營養(yǎng)要素，即碳源、氮源、能源、生長因子，無機(jī)鹽和水。一方面，如何合理地利用這些營養(yǎng)要素，設(shè)計(jì)出合理的培養(yǎng)基配方是個(gè)問題；另一方面，設(shè)計(jì)出的培養(yǎng)基是否符合微生物的生長需求、代謝物的環(huán)境要求、經(jīng)濟(jì)等方方面面也是問題，都值得我們深入研究。
固體培養(yǎng)基：用于分離、純化、鑒別、技數(shù)和保存微生物菌種等。
液體培養(yǎng)基：用于擴(kuò)大培養(yǎng)、搖瓶研究和鑒別性研究。半固體培養(yǎng)基：用于厭氧菌培養(yǎng)菌分離和培養(yǎng)、觀察微生物運(yùn)動(dòng)、保藏微生物菌種等。
常見的基礎(chǔ)培養(yǎng)基：比如，LB培養(yǎng)基、YPD培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基……常見的選擇培養(yǎng)基：比如，以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基可用于篩選纖維素降解菌、無氮培養(yǎng)基只能供有固氮能力的固氮菌生長……常見的鑒別培養(yǎng)基：比如，EMB培養(yǎng)基（伊紅-亞甲藍(lán)培養(yǎng)基）
4.培養(yǎng)基的選擇原則
目的要明確：明確培養(yǎng)哪類微生物，產(chǎn)物是什么，用途等等
營養(yǎng)協(xié)調(diào)：參考微生物細(xì)胞組成元素。
理化適宜：培養(yǎng)基的pH、滲透壓等物理化學(xué)條件較為適宜。
二、微生物培養(yǎng)基的制備
（一）不同微生物的培養(yǎng)條件和最適培養(yǎng)基配方
比如，枯草芽孢桿菌，最適培養(yǎng)條件：37℃、pH7，最適培養(yǎng)基配方：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；
大腸桿菌，最適培養(yǎng)條件：37℃、pH7，最適培養(yǎng)基配方：LB培養(yǎng)基；
酵母菌，最適培養(yǎng)條件：30℃、pH5，最適培養(yǎng)基配方：YPD培養(yǎng)基；
乳酸菌，最適培養(yǎng)條件：37℃、pH6，最適培養(yǎng)基配方：MRS培養(yǎng)基；
霉菌，最適培養(yǎng)條件：28℃、pH5.5，最適培養(yǎng)基配方：PDA培養(yǎng)基；
鏈霉菌，最適培養(yǎng)條件：28℃、pH5.5，最適培養(yǎng)基配方：高氏1號(hào)培養(yǎng)基……
（二）培養(yǎng)基配制的步驟和注意事項(xiàng)培養(yǎng)基的配制跟做菜一樣，一樣都不能落下，需要找原料配料、原料溶解后需要調(diào)節(jié)溶液pH值、分裝、包裝、滅菌等步驟。
(1) 計(jì)算：根據(jù)培養(yǎng)基配方，計(jì)算實(shí)際用量，記錄實(shí)際稱量質(zhì)量。用類似表格進(jìn)行記錄。
(2) 稱量：將所有物品放在天平左側(cè)，依次稱量各試劑，倒入燒杯中。稱完每種試劑，放到天平右側(cè)，標(biāo)記√或×或—。要選擇合適的天平進(jìn)行稱量，量少選用電子天平，量多選用分析天平，如果是大量的試劑，則選用臺(tái)秤。
(3) 溶解：先加入2/3水溶解，待全部溶解后，定容。
(4) 調(diào)節(jié)pH值：除特殊說明，一般用1mol/LNaOH或1mol/LHCl調(diào)節(jié)溶液pH。可以用pH試紙也可以用pH計(jì)，pH試紙比較粗略，pH計(jì)精確但需要經(jīng)常校準(zhǔn)。
(5)分裝：根據(jù)試驗(yàn)要求，將液體培養(yǎng)基分裝至三角瓶或其他容器內(nèi)。
(6)封口：用透氣膜或棉塞封口。標(biāo)記培養(yǎng)基名稱、日期等。
透氣膜使用方便，一般不重復(fù)使用；棉花塞透氣性好，麻煩不美觀，可以重復(fù)使用，根據(jù)需要使用。
(7)滅菌：將上述配制好的培養(yǎng)基放入高壓蒸汽滅菌器中滅菌，設(shè)定合適的溫度和時(shí)間。(8)冷卻：待滅菌完成后，取出，冷卻，冷卻后使用。(9)整理：將試劑和其他物品放回原處，擦拭臺(tái)面。固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基的區(qū)別在于：一個(gè)是固體，一個(gè)是液體；一個(gè)加了凝固劑瓊脂粉，另一個(gè)沒加凝固劑；固體培養(yǎng)基用于分離、培養(yǎng)、鑒別菌種，液體培養(yǎng)基用于擴(kuò)大培養(yǎng)。(1)計(jì)算：同液體培養(yǎng)基配制。(2)準(zhǔn)備培養(yǎng)皿：將試管和培養(yǎng)皿洗凈、干燥，使各培養(yǎng)皿蓋方向一致，用牛皮紙或報(bào)紙包好，注明皿蓋的方向，高壓蒸汽滅菌或干燥滅菌后烘干備用，也可直接使用一次性無菌培養(yǎng)皿。玻璃培養(yǎng)皿可以重復(fù)利用，處理麻煩；一次性培養(yǎng)皿省事，成本高。(3)稱量：除瓊脂粉外，其余試劑稱量同液體培養(yǎng)基配制。先不稱量瓊脂粉。(4)溶解：溶解步驟同液體培養(yǎng)基配制。(5)調(diào)節(jié)pH值：同液體培養(yǎng)基配制(7)加熱溶解：在常溫下瓊脂粉不溶，需要加熱溶解，不需要分裝的也可以直接滅菌。滅菌之后要搖勻，否則瓊脂粉沉在底部，容易不凝固或太硬。(8)分裝：固體培養(yǎng)基分裝需要在瓊脂粉溶解后進(jìn)行分裝。試管1/4高度，三角瓶不超過1/2容積，對(duì)于好養(yǎng)菌的培養(yǎng)，三角瓶容積的1/10，也可根據(jù)目標(biāo)菌的培養(yǎng)條件，適當(dāng)調(diào)整。(9)封口：試管用試管塞封口，然后包上牛皮紙，用皮筋或棉線捆綁；三角瓶用透氣膜或紗布封口，用皮筋或棉線捆綁。標(biāo)記培養(yǎng)基名稱、日期等信息。硅膠塞透氣性差，使用方便，棉花塞透氣性好，麻煩不美觀，根據(jù)需要使用。
(10)滅菌：將上述配制好的培養(yǎng)基放入高壓蒸汽滅菌器中滅菌，設(shè)定合適的溫度和時(shí)間。還有部分不能滅菌的試劑，需要采用過濾除菌。
比如，胰蛋白胨和酵母浸粉適合121℃，滅菌20min；葡萄糖適合115℃，滅菌20min，氨芐需要過濾除菌。
(11)冷卻：待滅菌鍋溫度降至80℃以下，取出培養(yǎng)基，輕輕搖勻，準(zhǔn)備倒平板，或擺斜面。待溫度降至50℃左右，取出尚未凝固的培養(yǎng)基置于超凈工作臺(tái)內(nèi)，略打開無菌培養(yǎng)皿蓋露一小縫 )，倒入培養(yǎng)基，封蓋、冷凝，凝固后倒置備用。
斜面長度不超過試管的1/2-2/3，斜面過長容易染菌，不能使用，應(yīng)舍棄。
(12)整理：將試劑和其他物品放回原處，擦拭臺(tái)面。(1)要選擇合適的天平進(jìn)行稱量，量少選用電子天平，量多選用分析天平，如果是大量的試劑，則選用臺(tái)秤。(3)易與稱量紙粘連一起的試劑，可以將試劑與稱量紙一起放入水中，試劑與稱量紙分離后，取出稱量紙。(4)詳細(xì)記錄培養(yǎng)基的名稱、配方、來源、各成分的廠家批次，最好保留樣品以備后續(xù)檢驗(yàn)。(5)滅菌條件不一致的試劑，要單獨(dú)稱量，單獨(dú)滅菌。
(6)調(diào)節(jié)溶液pH，不能過酸過堿來回調(diào)節(jié)，盡量不要調(diào)過，以免影響溶液中離子濃度。
(7)配制試管培養(yǎng)基，要將試管豎起來，不能平放。(8)試管封口有棉塞、硅膠塞、橡膠塞和試管塞，可以根據(jù)用途，進(jìn)行選擇。(9)倒平板之前，要靠壁搖勻，不能有氣泡，否則既不美觀，也不實(shí)用。(10)擺斜面時(shí)，斜面不能太長，容易污染，斜面太短可以使用，但有點(diǎn)浪費(fèi)空間。
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