1 .檢驗(yàn)方法

依據(jù) GB 4789.2-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》中要求以無菌操作取檢樣25g（mL）剪碎放于含有225mL滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液中，經(jīng)振搖或研磨做成1︰10的均勻稀釋樣液，按照標(biāo)準(zhǔn)要求制備10倍系列稀釋樣品勻液。根據(jù)污染情況的估計(jì)，選擇2～3個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度作2個(gè)平皿，每個(gè)平皿注入培養(yǎng)基約15~20mL，并轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿使混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36℃±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h±2h。計(jì)數(shù)后以同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)報(bào)告。

2. 數(shù)學(xué)模型

設(shè)菌落總數(shù)為A，檢測(cè)結(jié)果為X，則A=X CFU/g（mL）。

3 .計(jì)算不確定度
3.1 在微生物檢驗(yàn)中，樣品中細(xì)菌分布的均勻性和重復(fù)測(cè)量帶來的不確定度是影響檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度的主要原因，而B類不確定度分量對(duì)合成不確定度影響較少。按 GB 4789.2-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》中方法，同一樣品每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平衡樣，因此可以采用合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差求檢測(cè)結(jié)果的不確定度 見表1。

3.2 從檢驗(yàn)結(jié)果可知，如直接用貝塞爾公式計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差，由于數(shù)據(jù)的散發(fā)性較大，計(jì)算出的合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差很大，當(dāng)樣本均值較小時(shí)其不確定度則會(huì)過大，此時(shí)可以對(duì)上述數(shù)據(jù)取對(duì)數(shù)后，計(jì)算出樣本檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)數(shù)值的均值和殘差，將中間計(jì)算結(jié)果 見表2。根據(jù)貝賽爾公式，可計(jì)算出檢測(cè)結(jié)果對(duì)數(shù)值的合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差：

取置信水平P＝95%，自由度ν＝19，查t分布表得：

分布于X±0.043之間。當(dāng)檢測(cè)結(jié)果以平衡樣結(jié)果平均值表示時(shí)，相對(duì)于對(duì)數(shù)值的取值再取反對(duì)數(shù)得其取值區(qū)間。這個(gè)取值區(qū)間適合于任何一次檢測(cè)。

3.3 例1、3#樣品，對(duì)數(shù)值的平均值為2.708，取值區(qū)間為2.665～2.751，取反對(duì)數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為462～564 CFU/g（mL），菌落總數(shù)的取值區(qū)間為460～560CFU/g（mL）。

例2、12#樣品，對(duì)數(shù)值的平均值為3.203，取值區(qū)間為3.160～3.246，取反對(duì)數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為1445～1762u/g（mL），菌落總數(shù)的取值區(qū)間為1400～1800CFU/g（mL）。

例3：18#樣品，對(duì)數(shù)值的平均值為4.0115，取值區(qū)間為3.9685～4.0545，取反對(duì)數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為9300～11337 u/g（mL），菌落總數(shù)的取值區(qū)間為9300～11000CFU/g（mL）。

4 .小結(jié)
從以上計(jì)算結(jié)果可知，由于檢驗(yàn)結(jié)果的散發(fā)性較大，如直接用貝賽爾公式計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差所得到的不確定度不適合每一個(gè)樣本。當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果取對(duì)數(shù)后，用合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差求檢驗(yàn)結(jié)果的不確定度則使用方便，并且適合于每一個(gè)樣本。隨著檢驗(yàn)結(jié)果的不斷增加，可隨時(shí)加入到合并樣本中，重新計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差，更新其不確定度的取值范圍。