答：化學(xué)法是每次都要做的，生物法可以定期做，根據(jù)滅菌鍋的使用頻率，每周、每半月或每月做一次即可。

 答：SDA不是選擇性培養(yǎng)基，而是一種廣譜的增菌培養(yǎng)基，pH范圍5.4-5.8，某些細(xì)菌是可以在SDA上生長(zhǎng)的，霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)時(shí)SDA上生長(zhǎng)的菌均應(yīng)計(jì)入霉菌和酵母菌總數(shù)；或者可以經(jīng)過(guò)評(píng)估選擇含有抗生素（如氯霉素）的SDA或者玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)。

 答：在進(jìn)行微生物培養(yǎng)時(shí)，若正置培養(yǎng)，瓊脂培養(yǎng)基中的水分易蒸發(fā)使平板干裂，不利于微生物的生長(zhǎng)；同時(shí)水蒸汽會(huì)在平皿蓋上形成冷凝水，若回落在培養(yǎng)基表面，會(huì)使菌落蔓延生長(zhǎng)，無(wú)法計(jì)數(shù)，若冷凝水太多會(huì)使培養(yǎng)基與平皿分離，容易滑動(dòng)倒置培養(yǎng)可減少培養(yǎng)基表面的空氣流動(dòng)，減慢培養(yǎng)基中水分蒸發(fā)的速度，充分維持彈性，有利于菌株的生長(zhǎng)和繁殖，防止空氣中雜菌對(duì)培養(yǎng)基及培養(yǎng)物造成污染；也會(huì)由于重力作用在一定程度上使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)沉積到培養(yǎng)基表面，有利于微生物利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；倒置的平板方便拿取，避免環(huán)境中雜菌的污染。

需要注意的是，《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)》（GB4789.15-2016）是要求正置培養(yǎng)，而非倒置，以防霉菌孢子形成次生菌落，影響計(jì)數(shù)結(jié)果。

問(wèn)：食品企業(yè)的環(huán)境檢測(cè)應(yīng)該依據(jù)那個(gè)標(biāo)準(zhǔn)？

答：GB/T16294-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》都有規(guī)定，可以做為參考。

問(wèn)：請(qǐng)問(wèn)高壓滅菌鍋需要操作人員有壓力容器操作證嗎?有些人說(shuō)屬于《特種設(shè)備安全監(jiān)察條例》需要操作證？

答：CNAS-CL 01-A001: 2018的 6.2.2.2條款里有說(shuō)講到，如實(shí)驗(yàn)室使用的高壓蒸汽滅菌器不屬于簡(jiǎn)單壓力容器(定義參見(jiàn)TSG R0003 -2007《簡(jiǎn)單壓力容器安全技術(shù)監(jiān)察規(guī)程》)時(shí)，操作人員需持有特種作業(yè)人員證。

問(wèn)：

答：開(kāi)瓶后的培養(yǎng)基，如果長(zhǎng)時(shí)間不使用，還在效期內(nèi)，建議開(kāi)瓶后間隔1年進(jìn)行復(fù)驗(yàn)。如果出現(xiàn)結(jié)塊，則不能使用。同理，如果同一批次一次購(gòu)買(mǎi)量較多，一年內(nèi)未使用完，也建議進(jìn)行復(fù)檢。

問(wèn)：什么是不可接受微生物？

答：不可接受微生物通常是指那些已知有明顯致病性的，存在足夠的數(shù)量，通過(guò)產(chǎn)品的給藥途徑可能導(dǎo)致患者不可接受風(fēng)險(xiǎn)的微生物。如何確定一種微生物是不可接受的，需要進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析，包括微生物負(fù)載量、微生物特性、產(chǎn)品特性、給藥途徑、對(duì)患者潛在影響等。

問(wèn)： 培養(yǎng)基滅菌沒(méi)有按照廠家提供的滅菌參數(shù)進(jìn)行，是否可行？

答：可以。廠家產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)提供的滅菌參數(shù)可作為參考使用，使用單位也可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況，在相關(guān)法規(guī)要求內(nèi)，使用自己驗(yàn)證過(guò)的滅菌參數(shù)來(lái)執(zhí)行。

【法規(guī)來(lái)源：中國(guó)藥典2020版9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則   ……培養(yǎng)基滅菌應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗(yàn)證的參數(shù)進(jìn)行……】

問(wèn)：革蘭氏染色有哪些注意事項(xiàng)？

答：（1）最好挑選18-24h的菌落進(jìn)行革蘭氏染色,培養(yǎng)時(shí)間過(guò)久的的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌可能會(huì)被染成紅色而造成假陰性。

（2）挑取適量的菌，不宜過(guò)多,均勻涂開(kāi)。

（3乙醇脫色是革蘭氏染色是否成功的關(guān)鍵,15-30s為宜，脫色不夠可能會(huì)造成假陽(yáng)性,脫色過(guò)度可能會(huì)造成假陰性。

問(wèn)：如何根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要制備斜面？

答：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，擺放斜面一般有三種形式：

（1）長(zhǎng)斜面：斜面底部剛覆蓋試管底部，上部距管口2.5-3cm左右；例如TSA傳代斜面。

（2）高層斜面：斜面與底層高度約為2:3，即底部高約3cm，斜面長(zhǎng)度約2cm；如三糖鐵高層斜面。

（3）普通斜面：斜面底部距試管底部約1cm，上部距管口約2.5-3cm。

問(wèn)：三糖鐵培養(yǎng)基顏色變化原理是什么？ 

答：該培養(yǎng)基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1，只能利用葡萄糖的細(xì)菌，分解葡萄糖產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來(lái)又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖的細(xì)菌則產(chǎn)生大量的酸，使整個(gè)培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。如菌種接至培養(yǎng)基培養(yǎng)后產(chǎn)生黑色沉淀，是因?yàn)槟承┘?xì)菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反應(yīng)，生成黑色的硫化亞鐵沉淀。