食品伙伴網(wǎng)注：本方法源自奶牛乳房炎防治技術(shù)指南(試行)（農(nóng)醫(yī)發(fā)[20l0]29號(hào)）

　　引起臨床型乳房炎或者亞臨床型乳房炎的鏈球菌常見(jiàn)的有無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌以及乳房鏈球菌。

　　1主要試劑和試驗(yàn)方法

　　CAMP試驗(yàn)：在血瓊脂平板上用金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物劃一條直線，然后將鏈球菌培養(yǎng)物劃一條線，與金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物的劃線相互垂直，但不要接觸，二者相距3-5mm，各鏈球菌分離菌劃線間距l(xiāng)0～20mm。置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。在兩劃線交界處出現(xiàn)箭頭樣的溶血區(qū)為陽(yáng)性。

　　2乳樣的采集

　　選取出現(xiàn)臨床癥狀（或者懷疑為亞臨床型乳房炎）乳房炎奶牛，先用溫水，再用0.2％新潔爾滅擦洗乳房，最后用70％的酒精擦拭乳頭。采樣者同時(shí)進(jìn)行手指擦拭消毒。每個(gè)乳室先擠去頭2～3把奶，以排除污染的雜菌，每頭奶牛取乳樣5mL于無(wú)菌乳樣杯中，待檢。

　　3病原菌的分離培養(yǎng)

　　初步診斷：將少量乳汁涂片、革蘭氏染色、鏡檢。如發(fā)現(xiàn)圓球形革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌可懷疑為鏈球菌。

　　分離培養(yǎng)：將乳樣搖勻，分別取適量接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯（10％血清）、鮮血瓊脂、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（平板）后，置于37℃溫箱培養(yǎng)24～48h。觀察每個(gè)平板中細(xì)菌生長(zhǎng)的情況，記錄菌落生長(zhǎng)表現(xiàn)。

　　普通瓊脂平板上，37℃，24～72h培養(yǎng)后，未見(jiàn)到菌落。

　　鮮血瓊脂平板上長(zhǎng)有灰白色、半透明表面光滑圓形隆起的小菌落，出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，如果是β溶血?jiǎng)t疑為無(wú)乳鏈球菌，如果為α溶血，疑為停乳鏈球菌或者乳房鏈球菌，如為γ溶血，則疑為乳房鏈球菌。

　　血清肉湯中生長(zhǎng)初呈均勻渾濁，管底出現(xiàn)絮狀沉淀，上清變得透明。

　　挑取典型菌落涂片、染色、鏡檢，鏡檢如呈球狀，短鏈狀或者長(zhǎng)鏈狀排列，無(wú)芽胞、莢膜，革蘭氏染色陽(yáng)性則疑為鏈球菌。

　　4生化鑒定

　　鏡檢形態(tài)符合鏈球菌特性，且觸酶試驗(yàn)陰性細(xì)菌，即鑒定為鏈球菌屬細(xì)菌。若細(xì)菌CAMP試驗(yàn)陽(yáng)性，不水解七葉苷和馬尿酸鈉，即鑒定為無(wú)乳鏈球菌；若細(xì)菌CAMP試驗(yàn)陰性，不水解七葉苷和馬尿酸鈉，即鑒定為停乳鏈球菌；若細(xì)菌CAMP試驗(yàn)陰性，水解七葉苷和馬尿酸鈉，即鑒定為乳房鏈球菌。

　　5動(dòng)物試驗(yàn)

　　對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，只有停乳鏈球菌具有致病性，將其18h血清肉湯培養(yǎng)物0.5mL注入小白鼠腹腔，或給家兔靜脈接種l～2mL，可使動(dòng)物在1周內(nèi)死亡。對(duì)接種后發(fā)病、死亡小鼠（家兔）的肝臟進(jìn)行病原菌重分離。進(jìn)行菌落涂片、革蘭氏染色、顯微鏡檢查，觀察所分離菌株是否為原接種菌。如果是則進(jìn)一步確定病原菌為停乳鏈球菌。其他兩種鏈球菌并不能使試驗(yàn)動(dòng)物致死。