金晶 殷愛琴 徐子茗
哈爾濱市南崗區(qū)疾病預防控制中心

本文對微生物實驗室在培養(yǎng)基購置、貯存、制備、使用等方面應采取的質量控制措施進行討論，談一些觀點和看法。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。

1 培養(yǎng)基、抗血清和試劑對微生物檢驗質量的影響

1.1 購置培養(yǎng)基、抗血清和試劑時要求供應商提供產品質控證書，盡量選擇通過ISO9000認證的生產廠家。

使用前首先對外觀、批號、pH 值、滅菌要求、選擇性等進行初步評估，用陽性和陰性對照菌株做質量控制實驗，要按照培養(yǎng)基和試劑標簽說明的貯藏條件保存，自配的染液每周必須作質控。如有條件可參照國際食品微生物與食品衛(wèi)生委員會提供的關于培養(yǎng)基質控方法進行質控。

1.2 使用 培養(yǎng)基的使用應在有效期內，開封后的保存、制備過程中器皿管壁的潔凈度以及配制時的pH值要嚴格按規(guī)定控制，不同批號的培養(yǎng)基和試劑不要混合使用。目前市售的大多數(shù)為半成品培養(yǎng)基，無論是分裝后滅菌，還是無菌分裝，都應進行嚴格的無菌試驗，證明無菌生長后才能使用。從可靠來源獲得的診斷血清應注明收到的日期，如為凍干制品，還應注明配成水溶液的日期。使用前檢查外觀應清澈，如出現(xiàn)混濁表示己被雜菌污染。使用時應注意其有效期和滴度，使用前用標準菌株試驗其敏感性和特異性。

2 培養(yǎng)基的儲存

干粉培養(yǎng)基應保存在陰涼干燥處，要避免陽光直射；未開瓶的培養(yǎng)基在室溫下的最長保存2年，開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應注意防潮并在6個月內用完。應定期對儲存中的培養(yǎng)基進行常規(guī)檢查，如容器密閉性復查、首次開封日期、內容物的感官檢查，如果培養(yǎng)基發(fā)生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。

3 培養(yǎng)基的性能測試

3.1 外觀控制制備好的培養(yǎng)基應有相應的顏色，一般的培養(yǎng)基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化，是否蒸發(fā)／脫水。

3.2 污染控制 從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進行污染測試(無菌試驗)，確定無微生物生長方可使用。

3.3 性能測試

3.3.1 測試菌株選擇測試菌株是具有其代表種的穩(wěn)定

特性并能有效證明實驗室特定培養(yǎng)基最佳性能的一套菌株，應來自國際／國家標準菌種保藏中心ATCC標準菌株，菌株的選擇參考衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質量檢驗規(guī)程》。

3.3.2 定量測試方法改良Miles-Misra法測試菌株過夜培養(yǎng)物10倍遞增稀釋；測試平板和參照平板劃分為4個區(qū)域并標記；從最高稀釋度開始，分別滴一滴稀釋液于試驗平板和對照平板標記好的區(qū)域；將稀釋液涂滿整個1/4區(qū)域，37℃培養(yǎng)18小時；對易計數(shù)的區(qū)域計數(shù)，按公式計算生長率(生長率=待測培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)／參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù))。非選擇性培養(yǎng)基上目標菌的生長率應不低于0.7，該類培養(yǎng)基應易于目標菌生長；選擇性培養(yǎng)基上目標菌的生長率應不低于0.1。

3.3.3 半定量測試方法 改進的劃線法接種法平板分ABCD四區(qū)，共劃16條線，平行線大概相隔0.5cm，每條有菌落生長的劃線記作1分，每個僅一半的線有菌落生長記作0.5分，沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半記作0分，分數(shù)加起來得到生長指數(shù)G。目標菌在培養(yǎng)基上應呈現(xiàn)典型的生長，而非目標菌的生長應部分或完全被抑制， 目標菌的生長指數(shù)G大于6時，培養(yǎng)基可接受。

3．3．4 定性測試方法平板接種觀察法用接種環(huán)取測試菌培養(yǎng)物，在測試培養(yǎng)基表面劃平行直線。按標準中規(guī)定的培養(yǎng)時間和溫度對接種后的平板進行培養(yǎng)， 目標菌應呈現(xiàn)良好生長，并有典型的菌落外觀、大小和形態(tài)，非目標菌應是微弱生長或無生長。