一、開箱檢查:
打開包裝箱,查看斜面是否破損,菌株編號(hào)與說明書是否一致。
二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:
仔細(xì)閱讀菌株說明書,準(zhǔn)備2個(gè)新鮮平板或斜面。
三、器材滅菌:
斜面試管表面消毒后,轉(zhuǎn)移至生物安全柜中,管口灼燒滅菌冷卻備用。接種鋤和接種鏟在酒精燈外焰翻轉(zhuǎn)灼燒滅菌3-5分鐘,冷卻備用,冷卻后用接種鋤在斜面上相距0.5cm處切兩條平行線(與試管垂直)。
四、切分斜面:
換接種鏟在兩條平行線之間相距0.5cm處切兩條平行線(與試管平行),形成0.5cm*0.5cm的小正方形菌塊。
五、霉菌轉(zhuǎn)接:
用接種鏟挑取菌塊平放到平板或斜面(固體瓊脂表面)上(菌塊正面朝上)。轉(zhuǎn)接多個(gè)平板或斜面,重復(fù)以上操作即可。
六、完成培養(yǎng):
平板正放,斜面傾斜放置于霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(參照菌種說明書上的培養(yǎng)條件設(shè)置溫度)
(1) 實(shí)驗(yàn)材料
根霉,毛霉,黑曲霉,青霉,土豆瓊脂培養(yǎng)基,培養(yǎng)皿,載玻片,蓋玻片,鑷子,顯微鏡,小刀,U形管等。
(2) 實(shí)驗(yàn)步驟
1、配置培養(yǎng)基:根據(jù)原料用量配置土豆培養(yǎng)基。配置時(shí),先急火煮沸,在溫火加熱20min,若有渾濁出現(xiàn),則需過濾,然后定容。包扎土豆培養(yǎng)基,甘油等其他用品。滅菌后取出備用2、培養(yǎng)小室準(zhǔn)備及滅菌 在培養(yǎng)皿底部鋪一張略小于皿底的圓形濾紙片,濾紙片上依次放上“U”形載玻片擱架、載玻片、蓋玻片-四片,蓋上皿蓋,牛皮紙包扎,于恒溫干燥箱中121℃滅菌30min烘干備用;
2、瓊脂薄片制作:
a) 將稍微冷卻的培養(yǎng)基,倒在培養(yǎng)皿 中,做成薄平板。培養(yǎng)基應(yīng)該要倒 得薄而均勻。注意無菌操作。
b) 用解剖刀將瓊脂薄平板切成邊長(zhǎng)不大于1cm的瓊脂薄片
c) 用解剖刀將瓊脂薄片移至小室載玻片上(一個(gè)載玻片上方兩塊薄片)
3、取菌接種:用接種環(huán)挑取少量待觀察的霉菌孢子(霉菌菌種的表面輕輕刮取即可),接種于固體培養(yǎng)基邊緣,以便于霉菌生長(zhǎng)。接種時(shí)只要將帶菌的接種環(huán)在載玻片上輕輕碰幾下即可。接種量要少,以免培養(yǎng)后菌絲過于稠密而影響觀察。
4、加蓋玻片:用無菌鑷子將皿內(nèi)的蓋玻片蓋在瓊脂薄層上,用鑷子輕壓蓋玻片,使蓋玻片和載玻片之間的距離相當(dāng)接近,但不能壓扁。蓋玻片不能緊貼載玻片,要彼此留有小縫隙,一是為了通氣,二是使各部分結(jié)構(gòu)平行排列,易于觀察。
5、倒保濕劑:每皿倒入約2-3mL 20%的經(jīng)滅菌處理的甘油,使皿內(nèi)濾紙完全濕潤(rùn),以保持皿內(nèi)濕度,蓋上皿蓋。制成載玻片濕室。6、正置培養(yǎng):將平皿置于27℃霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一周。
7、觀察: 將培養(yǎng)好的載玻片取出,置于顯微鏡下直接觀察。
(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1.根霉:菌絲無隔,有假根、匍匐菌絲。假根著生處有向上直立的孢囊梗,其頂端膨大成孢子囊,底部為半球形囊軸。
2.毛霉:孢囊梗直接由菌絲出,頂端為球形孢子囊
3.黑曲霉:菌絲有隔,氣生菌絲分化為分生孢子梗(無隔),頂端 膨脹為球狀頂囊。
4.青霉:菌絲有隔,分生孢子梗頂端不膨大,無頂囊,多次分枝成幾輪小梗,小梗頂端長(zhǎng)孢子。分生孢子梗呈掃帚狀。
如何讓霉菌產(chǎn)孢子?
一般微生物都會(huì)在逆境下產(chǎn)孢子,比如低溫、紫外照射等惡劣的生存條件,有的情況下,陽光照射也能促使產(chǎn)孢。不同的菌的產(chǎn)孢條件還不太一樣,要因菌而異,和培養(yǎng)基也有關(guān)?梢哉艺蚁嚓P(guān)資料查查產(chǎn)孢培養(yǎng)基,可以試試水瓊脂培養(yǎng)基(直接在水中加瓊脂、無其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì))。