鞭毛是細(xì)菌的運動“器官”，一般細(xì)菌的鞭毛都非常纖細(xì)，其直徑為0.01—0.02μm，在普通光學(xué)顯微鏡的分辨力限度以外，故需要用特殊的鞭毛染色法，才能看到。鞭毛染色是借媒染劑和染色劑的沉淀作用，使染料堆積在鞭毛上，以加粗鞭毛的直徑，同時使鞭毛著色，在普通光學(xué)顯微鏡下能夠看到。

    在顯微鏡下觀察細(xì)菌的運動性，也可以初步判斷細(xì)菌是否有鞭毛。通常使用壓滴法或懸滴法觀察細(xì)菌的運動性。觀察時，要適當(dāng)減弱光線，增加反差，如果光線很強，細(xì)菌和周圍的液體就難以辨別。

主要試劑

    鞭毛染色液，萬分之一的美藍水溶液，凡士林，無菌水。

主要設(shè)備

載玻片，凹玻片，蓋玻片，酒精燈，顯微鏡等

實驗材料

蘇云金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis），假單胞菌（Pseudomonas sp．），金黃色葡萄球菌。

實驗步驟

1．鞭毛染色

   1) 菌種用新培養(yǎng)的菌種為宜，如所用菌種已長期未移種，則用新制備的斜面連續(xù)移種2—3次后再使用。最好是將經(jīng)活化的菌種接種到新制備的瓊脂斜面或半固體培養(yǎng)基平皿上，培養(yǎng)10小時左右，備用。

   2) 制片在載玻片的一端滴一滴蒸餾水，用接種環(huán)挑取少許備用的菌苔，最好從菌落的邊緣取菌苔，注意不要挑上培養(yǎng)基，在載玻片的水滴中輕沾幾下。將載玻片稍傾斜，使菌液隨水滴緩慢流到另一端，然后平放在空氣中干燥。

   3) 染色涂片干燥后滴加A液染3—5分鐘，用蒸餾水沖洗，或?qū)�殘水瀝干或用B液沖去殘水（注意：一定要充分洗凈A液后再加B液，否則背景很臟）。洗凈A液滴加B液后，將玻片在酒精燈上稍加熱，使其微冒蒸汽且不干，一般染30—60秒鐘。然后用蒸餾水沖洗，自然干燥。

   4) 鏡檢鏡檢時，如未見鞭毛，應(yīng)在整個涂片上多找?guī)讉�視野，有時只在部分涂片上染出鞭毛。菌體為深褐色，鞭毛為褐色。

細(xì)菌鞭毛染色要求非常小心細(xì)致，染色成功的關(guān)鍵主要決定于：

      a. 菌種活化的情況，即要連續(xù)移種幾次；

      b. 菌齡要合適，一般在幼齡時鞭毛情況最好，易于染色；

      c. 新鮮的染色液；

      d. 載玻片要求干凈無油污。

鞭毛染色所用載玻片的清洗方法如下：

    選擇光滑無傷痕的玻片。先用洗衣粉煮沸，洗衣粉最好在洗玻片前加蒸餾水煮沸，用濾紙過濾去渣。為了避免玻片彼此磨損，最好把載玻片放在特制的架上煮，煮畢稍冷卻后取出，用清水洗凈，再放入濃洗液中浸泡24小時左右，取出用清水沖洗殘酸，最后用蒸餾水洗凈，瀝干水并放于95％乙醇中脫水，取出玻片，用火焰燒去酒精，立即使用。如不立刻使用，可存放于干凈的盒中或50％乙醇中短期存放。由于空氣中常常漂浮油污，最好立即使用。在洗凈的玻片上滴上水滴后應(yīng)能均勻散開。

2．運動性觀察

   1) 壓滴法

      a. 分別將5ml無菌水倒入蘇云金芽孢桿菌、假單胞菌和金黃色葡萄球菌的斜面培養(yǎng)物內(nèi)，制成菌懸液。各取出1ml菌液稀釋至肉眼看不到混濁為止。

      b. 各取2—3環(huán)三種稀釋菌液，分別放在三片清潔的載玻片中央，再各放一環(huán)萬分之一的美藍水溶液混勻。

      c. 用鑷子夾一潔凈的蓋玻片，使其一邊先接觸菌液，然后將整個蓋玻片慢慢放下，注意不要產(chǎn)生氣泡。按此法分別將蓋玻片覆蓋于三種菌液上。

      d. 先以低倍鏡找到標(biāo)本，再用高倍鏡觀察，觀察時光線要調(diào)得暗些。

   2) 懸滴法

      a. 在潔凈蓋玻片周圍涂少許凡士林。

      b. 在蓋玻片中央滴一小滴菌液，或用接種環(huán)取1—2環(huán)菌液置于中央。

      c. 將凹玻片反轉(zhuǎn)，使凹窩中心對準(zhǔn)蓋玻片上的菌液滴，液滴不得與凹玻片接觸，以接種環(huán)柄輕壓使蓋玻片與凹玻片粘在一起，液滴處于封閉的小室中，防止液滴干燥和氣流的影響。

      d. 小心將凹玻片翻轉(zhuǎn)過來，使菌滴仍懸浮在蓋玻片下和凹窩中心（圖Ⅳ-3）。

      e. 先用低倍鏡找到懸滴邊緣，再用高倍鏡觀察。觀察時光線要調(diào)得暗一些。

    用懸滴法分別觀察蘇云金芽孢桿菌、假單胞菌和金黃色葡萄球菌的運動性。細(xì)菌的運動有一定的前進方向，并可轉(zhuǎn)彎，極生單鞭毛菌類多為直線運動，周生鞭毛菌類多作波浪式運動。