采血 

 

（一）材料與試劑 

1．抗凝劑

（1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其鈉鹽或鉀鹽，它能阻止凝血酶原轉化為凝血酶，進而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白，從而阻止血液凝固。常用的肝素溶液濃度為1 000U/ml，市售肝素多為100U~126U／mg。

（2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是一種螯合劑。用生理鹽水配制成4％的溶液備用。

（3）阿氏液（Alsever液），配方如下：

枸櫞酸鈉（Na3 C6 H5 O7 ·5H2 O） 0.80g

枸櫞酸 0.0325g

葡萄糖 2.05g

氯化鈉 0.42g

H2 O 加至 100.00ml

混勻溶解后，114.3℃高壓蒸汽滅菌10min備用。

阿氏液中既含有枸櫞酸鈉抗凝劑，又含有細胞生存的營養(yǎng)，所以它既可做抗凝劑，又可做血細胞的保存液。

2．針頭 根據(jù)不同動物和采血部位，采用不同型號的針頭，用前必須滅菌或消毒。

3．采血容器 注射器或三角瓶等。

4．采血動物。

 

（二）操作方法 

1．采血法 各種動物采血方法不一。馬、牛、羊等大動物一般從頸靜脈采血，豬從頸靜脈、前腔靜脈或耳靜脈采血，家禽由翼下靜脈或心臟采血，兔由心臟或耳靜脈采血，犬由頸靜脈或四肢靜脈采血，豚鼠由心臟采血，小白鼠則可斷尾或剪斷腋下血管或剪斷眼球采血。

2．抗凝 采集血液最關鍵的問題是抗凝，采用什么方法進行抗凝，則根據(jù)實驗的要求和條件而定。最常用的方法如下：

（1）肝素抗凝：采血時，使每ml血液含15U~20U肝素即可。計算采集的血液量，按1 000U/ml的量加入肝素，直接放入采血容器中，采血時，邊采血邊輕輕搖動，使抗凝劑和血液混勻。對于采少量的血液或小動物采血，可直接用注射器抽取一定量的肝素液，再采血直接抗凝。

（2）EDTA抗凝：采血前，用滅菌生理鹽水將EDTA配制成4％溶液，然后按預采血液的量，以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液體量于采血容器內。采血，并不斷搖動采血容器，使之混勻。

（3）玻璃珠法：預先將適量的玻璃珠（根據(jù)采血量多少而定）清洗后，裝入采血容器中，滅菌后備用。采血過程中，邊采邊搖采血瓶，以使小玻璃珠在血液中滾動，以機械地除去纖維蛋白，使血液不能凝固。本法雖較麻煩，但對淋巴細胞的活性影響最小，且可減少血小板的混雜。

（4）阿氏液采血：以阿氏液和采血量以1︰1比例采集血液，邊采邊輕輕搖動采血瓶，使之混勻。用阿氏液采血，除了抗凝外，多用于紅細胞的保存。一般在4℃條件下，阿氏液中保存的紅細胞2周其活性和特性不變。

 

紅細胞的分離技術 

（一）材料與試劑 

1．肝素等抗凝劑

2．3％明膠液 取明膠3g，溶于0.9％滅菌鹽水100ml中，114.3℃滅菌10min，冷卻后4℃冰箱保存。臨用時，37℃預熱10min。

3．阿氏液

 

（二）操作方法 

1．采血抗凝，即為紅細胞。由于紅細胞與白細胞的比例相差懸殊，一般白細胞混雜在其中，忽略不計。

2．根據(jù)紅細胞的用途，可做進一步的處理。如計算紅細胞，可直接稀釋計數(shù)。如需做補體結合反應，或其它溶紅細胞反應，則需將紅細胞進行充分的清洗，以除去附著在紅細胞膜表面的血漿。一般用等滲的稀釋液連續(xù)清洗，2 000r/min離心10min，重復3~4次。

3．如需儲藏備用，則以阿氏液做抗凝劑采血，混勻后置4℃冰箱保存，可保存2周，其活性尚可。