答：保存的是第三代復(fù)活出來后，如果采用平板或肉湯活化相當(dāng)于轉(zhuǎn)接了一代，就是第四代了，如果還在瓷珠里的話就還是原來的代數(shù)。如果是保存在斜面上，這一支斜面一直就是第三代，如果轉(zhuǎn)接到另一支斜面就是第四代了。傳代原則，菌株活化復(fù)蘇不論以任何形式繁殖了一次就算是傳了一代。但如果僅是物理位置的轉(zhuǎn)移沒有繁殖就不是傳代，需要注意。

2.剛買回來的陽性菌株是第0代嗎？

答：一般菌株你買回來的時(shí)候上面都會(huì)寫明第幾代，常規(guī)來說都是第0代的。像購買的ATCC或CICC的凍干粉都是標(biāo)記為0代的。

3.菌株傳代保存到瓷珠里一定要挑單菌落嗎？

答：不一定非挑單菌落，但是一定要挑相同特征的菌落，就是說從同一個(gè)菌落純化出來的，以保證它們的特性完全一致。原則是盡量多挑，寧多勿少。

4.菌株保存是-70℃還是-80℃有具體標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定么？

答：其實(shí)是有標(biāo)準(zhǔn)的，《SN/T 2632-2010 微生物菌株常規(guī)保藏技術(shù)規(guī)程》是關(guān)于菌株保藏的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，大家可以學(xué)習(xí)一下，各個(gè)保存方式都有介紹，但是瓷珠是比較新興的保存方式暫時(shí)里面還沒有收錄。

5.怎樣延長菌株的保存時(shí)間呢？

大量的實(shí)驗(yàn)證明菌株在低溫、干燥、缺氧、缺營養(yǎng)的條件下保存效果是最好的，越接近這種保存條件，菌株的保存時(shí)間越長。

6.怎樣純化菌株？

純化就是從TSA上或別的非選擇性平板上轉(zhuǎn)接一次，這就相當(dāng)于純化了。

7. 我們保存的一代菌株是不是要重新傳代保存呢，認(rèn)證老師會(huì)不會(huì)認(rèn)為這是個(gè)錯(cuò)誤？

答：應(yīng)該不會(huì)，認(rèn)證老師不會(huì)提出這種問題的，不過最好是一代菌株保存一些、二代菌株保存一些，使用時(shí)工作菌株最好使用第三代菌株，一代菌株可作為長期保存用。

8. 為何要將第三代作為工作菌株？

答：多傳代幾次后菌株的活力會(huì)明顯提高，但最多傳代到第五代后就不能用了，因?yàn)榈谖宕�后菌株雖然不會(huì)完全變異，但變異率會(huì)明顯增加，因此選用第三代作為工作菌株是比較合適的，若使用第一、第二代菌株活力沒有那么強(qiáng)。

9.用瓷珠管反復(fù)上下?lián)u勻，有泡沫不容易吸出來，怎么辦？

答：不必特別劇烈大尺度的搖動(dòng)瓷珠管，稍微上下晃動(dòng)就可以；如果確實(shí)有泡沫的話可以靜置一會(huì)，讓菌株多吸附一下瓷珠也是可以的。

10. 老師，霉菌需要長出孢子保存，可有霉菌孢子的圖片，長到什么程度就可以保存了呢？

保存這種黑色孢子就可以，這是黑曲霉的圖片。

11. 瓷珠管液體混勻可以吹吸么？

答：不建議吹吸，因?yàn)榭諝饫锟赡芤矌в胁糠值募?xì)菌，萬一使用的槍頭等有菌混進(jìn)去就不太好了，直接擰緊保存管蓋子后上下?lián)u晃即可。

12. TSA斜面一般多少度保存，可以放在冷藏里嗎？

答：2-8℃保存，放在冷藏是可以的；注意弧菌和綠膿桿菌要放到室溫20-25℃保存，否則會(huì)很快死亡。

13.如果TSA斜面放在冷凍里面，會(huì)有什么影響？

答：瓊脂冷凍后性狀會(huì)發(fā)生改變，會(huì)變得很軟，結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，所以不建議冷凍；如果要冷凍的話就采用甘油保存法或瓷珠保存法。

14.用瓷珠管保存產(chǎn)氣莢膜梭菌老是保存不好！做好瓷珠管之后瓷珠管要放到厭氧袋里面再放到-20℃么？

答：如果冷凍保存最好放在厭氧袋里再-20°保存，保存效果還可以；或者可以采用庖肉培養(yǎng)基保存，它是一種液體培養(yǎng)基，將產(chǎn)氣莢膜梭菌接進(jìn)去然后2-8 ℃保存，可以保存一年沒有問題，在厭氧環(huán)境下保存效果最好。