藥品為預(yù)防、控制和治療疾病提供了強(qiáng)大的保障，在全球公共衛(wèi)生體系中扮演著至關(guān)重要的角色，疫苗作為特殊的藥品，其生產(chǎn)工藝更為復(fù)雜，是近年來藥品監(jiān)管部門關(guān)注的重點(diǎn)。自新版歐盟 GMP 附錄一提出污染控制策略(CCS)以來，CCS 已受到藥品生產(chǎn)企業(yè)和藥品檢查人員的廣泛關(guān)注。本研究以疫苗生產(chǎn)工藝過程為主線，結(jié)合近幾年疫苗檢查發(fā)現(xiàn)的 CCS 相關(guān)缺陷，分別從人員污染控制、設(shè)備與組件污染控制、物料污染控制、設(shè)施與環(huán)境污染控制、清潔驗(yàn)證等方面分析疫苗污染控制的關(guān)注要點(diǎn)。

我國在產(chǎn)的疫苗生產(chǎn)企業(yè)約有 50 多家，可生產(chǎn)各類疫苗約 60 多種，每年生產(chǎn)規(guī)模更是多達(dá)數(shù)億劑，全球排名前列。疫苗屬于預(yù)防類生物制品，接種者為健康群體，接種范圍廣，社會關(guān)注度高，一旦出現(xiàn)質(zhì)量問題，很容易發(fā)生群體性事件，疫苗還具有生產(chǎn)周期長、生產(chǎn)工藝復(fù)雜、原材料個體差異等特點(diǎn)，這些因素決定了疫苗產(chǎn)品的高風(fēng)險屬性^[1]。隨著《疫苗管理法》的出臺，我國的疫苗監(jiān)管有了根本遵循，監(jiān)管體系更加完善，監(jiān)管水平不斷提升，2022 年，世界衛(wèi)生組織(WHO)宣布我國順利通過疫苗國家監(jiān)管體系(NRA)評估，意味著我國的疫苗監(jiān)管已達(dá)到國際水平，疫苗上市許可持有人應(yīng)當(dāng)以此為契機(jī)，主動對標(biāo)國際新法規(guī)、新要求，不斷提高生產(chǎn)和質(zhì)量管理水平，落實(shí)疫苗全生命周期的質(zhì)量安全主體責(zé)任。

Part 1 污染控制策略

污染控制策略(CCS)一詞最早出自歐盟 2017 年發(fā)布的《GMP 附錄 1：無菌藥品生產(chǎn)》征求意見草案，在 2020 年二次征求意見后，最終于 2022 年 8 月正式發(fā)布^[2]，根據(jù)附錄中的釋義，CCS 是指源于現(xiàn)有產(chǎn)品和工藝的理解得出的針對微生物、內(nèi)毒素、熱原和微粒的一系列有計(jì)劃的控制措施，以確保工藝性能和產(chǎn)品質(zhì)量^[3]。藥品檢查合作計(jì)劃(PIC/S)于 2022年更新了其 GMP 附錄一《無菌藥品生產(chǎn)》，引入了 CCS 的概念，與歐盟 GMP 保持同步^[4]，隨后美國注射劑協(xié)會(PDA)、歐洲合規(guī)協(xié)會(ECA)以及中國醫(yī)藥設(shè)備工程協(xié)會(CPAPE)等組織也相繼發(fā)布了 CCS 指南及其征求意見稿。我國現(xiàn)行的《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》于 2010 年修訂，其正文第三條“無菌藥品的生產(chǎn)須滿足其質(zhì)量和預(yù)定用途的要求，應(yīng)當(dāng)最大限度降低微生物、各種微粒和熱原的污染”；正文第四十六條“生產(chǎn)的每個階段(包括滅菌前的各階段)應(yīng)當(dāng)采取措施降低污染”以及無菌藥品附錄等多處條款均提出要在生產(chǎn)全過程中控制污染，2023 年 4 月正式出版的新版《藥品 GMP 指南》也在《無菌制劑》上冊：無菌制劑生產(chǎn)和質(zhì)量管理概要章節(jié)中專門介紹了“污染控制策略”，提供了具體的技術(shù)要求和實(shí)施指導(dǎo)，由此可見，我國現(xiàn)行 GMP 體系與新版歐盟 GMP 污染控制策略在原則上基本保持一致，并逐步向其接軌^[5]。我國作為國際人用藥品注冊技術(shù)協(xié)調(diào)會(ICH)成員國和 PIC/S 申請國，相信在今后的 GMP 修訂及檢查過程中，勢必會增加對CCS 相關(guān)內(nèi)容的重點(diǎn)關(guān)注。

Part 2 工藝生產(chǎn)過程 CCS 檢查要點(diǎn)

疫苗工藝生產(chǎn)過程污染貫穿始終，工藝過程監(jiān)控是降低污染的重要措施，監(jiān)控要點(diǎn)包括關(guān)鍵工藝參數(shù)(CPP)和一般工藝參數(shù)(GPP)的偏離情況，中間產(chǎn)品微生物限度、內(nèi)毒素、支原體、病毒滅活驗(yàn)證等的超標(biāo)和超趨情況等。根據(jù)疫苗生產(chǎn)工藝特點(diǎn)，以下從菌/毒種培養(yǎng)、抗原收獲、抗原純化、半成品配制及分裝幾個關(guān)鍵過程進(jìn)行污染控制策略分析^[6]。

2.1菌/毒種

菌/毒種能夠直接影響疫苗的安全性和有效性，是決定疫苗質(zhì)量最關(guān)鍵的因素之一。結(jié)合近年的疫苗檢查情況分析，菌/毒種污染控制建議重點(diǎn)關(guān)注以下三個方面：一是細(xì)化操作規(guī)程，增強(qiáng)指導(dǎo)性，如在病毒接種操作規(guī)程中規(guī)定病毒稀釋時混勻的具體方式；二是加強(qiáng)無菌操作的規(guī)范性，如在細(xì)胞接種操作時，人員手部離開潔凈工作臺后再次進(jìn)入時要及時消毒；三是菌/毒種的儲存要防止混淆、差錯和污染，如菌/毒種備份冰箱是否專用并存放于相對安全的房間等。除此以外，菌/毒種的來源和追溯情況也是需要關(guān)注的重點(diǎn)，企業(yè)應(yīng)當(dāng)建立和保存供應(yīng)商審計(jì)、運(yùn)輸、檢驗(yàn)、建庫、貯存等相關(guān)的記錄。

2.2原液生產(chǎn)

2.2.1 擴(kuò)增培養(yǎng)

菌/毒種擴(kuò)增培養(yǎng)通常是原液生產(chǎn)的起點(diǎn)，細(xì)菌疫苗可以直接發(fā)酵培養(yǎng)，病毒疫苗還需將毒種接種在細(xì)胞載體上進(jìn)行培養(yǎng)，由于擴(kuò)增培養(yǎng)的介質(zhì)通常是培養(yǎng)基，且培養(yǎng)時間長，因此培養(yǎng)工序發(fā)生微生物污染的風(fēng)險較高。培養(yǎng)工序關(guān)注要點(diǎn)包括：一是設(shè)備、設(shè)施的狀態(tài)標(biāo)識管理，如發(fā)酵罐上呼吸器、壓縮空氣過濾器等應(yīng)定期更新狀態(tài)標(biāo)識，以確認(rèn)氣體能夠經(jīng)過有效過濾；二是有毒區(qū)壓差設(shè)計(jì)的合理性，如 C 級有毒區(qū)(負(fù)壓)與相鄰 D 級區(qū)之間的空氣是否直接流通；三是完整性測試儀管理，對于一次性使用儲液袋、濾芯等完整性測試未通過的原因均需要記錄并說明。總體而言，培養(yǎng)工序必須嚴(yán)格防范一切潛在的污染源，污染控制要從人、機(jī)、料、法、環(huán)通盤考慮。

2.2.2 抗原收獲

菌/毒種擴(kuò)增培養(yǎng)后的下一步即要進(jìn)行抗原收獲，該步驟通常以離心、過濾等方式去除雜質(zhì)、獲取目標(biāo)抗原，污染既包含內(nèi)源性污染如雜蛋白、核酸、細(xì)胞碎片等，也包含外源性污染如粒子、微生物和細(xì)菌內(nèi)毒素等。收獲工序關(guān)注要點(diǎn)有：一是對于關(guān)鍵工藝參數(shù)(CPP)等生產(chǎn)和檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的回顧情況，如是否將偏差批次產(chǎn)品的關(guān)鍵工藝參數(shù)納入質(zhì)量年度回顧報(bào)告中回顧；二是偏差的調(diào)查和風(fēng)險評估，在偏差處理時是否對偏離工藝的情況進(jìn)行充分評估，以有效預(yù)防污染的重復(fù)發(fā)生；三是生物安全控制措施的管理，包括病毒滅活驗(yàn)證試驗(yàn)樣品的轉(zhuǎn)運(yùn)和儲存驗(yàn)證等�？乖�收獲液是原液的初始階段，企業(yè)必須嚴(yán)格控制雜質(zhì)負(fù)荷，決不能依賴下游的純化工序來提高最終產(chǎn)品的純度。

2.2.3 抗原純化

純化不是一步的，而是一系列的過程，通常包括超濾、離心、層析、電泳、過濾等多種技術(shù)，目的是祛除產(chǎn)品中的雜質(zhì)，保證產(chǎn)品的安全。純化工序檢查要點(diǎn)有：一是超濾膜包、層析填料、濾芯等具有多孔復(fù)雜結(jié)構(gòu)材料的驗(yàn)證情況，如層析填料使用壽命驗(yàn)證時，檢驗(yàn)項(xiàng)目是否包含凝膠本身的理化參數(shù)；二是中間品儲存時限、生產(chǎn)時限的變更，如若延長中間品儲存時限，應(yīng)評估細(xì)菌內(nèi)毒素、抗原含量等的變化情況；三是過濾器的使用和驗(yàn)證，驗(yàn)證時是否對藥液過濾時限、過濾器二側(cè)壓力、浸出物等進(jìn)行了評估。純化工序步驟多，操作復(fù)雜，較容易發(fā)生污染和交叉污染，其污染控制的核心是嚴(yán)格按照批準(zhǔn)的工藝參數(shù)生產(chǎn)，一旦發(fā)生變更和偏差，均要對產(chǎn)品的污染情況進(jìn)行評估。

2.3制劑生產(chǎn)

疫苗的生物學(xué)特性決定其不能進(jìn)行熱力滅菌，因此半成品配制及分裝過程通常在 B+A 級潔凈環(huán)境中進(jìn)行，全程無菌操作。疫苗生產(chǎn)企業(yè)的無菌保證水平直接關(guān)系到產(chǎn)品的安全，是近年來檢查的重點(diǎn)^[6]。在近年的檢查中，對于無菌工藝模擬試驗(yàn)(APS)關(guān)注較多，表現(xiàn)在 APS 最差條件的設(shè)置；APS 樣品、剔廢樣品、剩余培養(yǎng)基的培養(yǎng)情況；環(huán)境監(jiān)測情況；APS 視頻和記錄的一致性等方面^[7-8]。此外，關(guān)鍵容器具及設(shè)備的使用和滅菌及存放條件、車間消毒與維護(hù)情況、關(guān)鍵物料的無菌處理情況等也是檢查重點(diǎn)關(guān)注項(xiàng)。 

Part 3 生產(chǎn)關(guān)鍵要素 CCS 檢查要點(diǎn) 

3.1人員污染控制

人是最大的污染源，對 CCS 的有效實(shí)施起到?jīng)Q定性作用。人員方面的污染控制建議關(guān)注以下幾個方面：一是人員培訓(xùn)情況，對于進(jìn)入潔凈區(qū)的所有人員都要進(jìn)行嚴(yán)格的培訓(xùn)，特別是微生物及無菌行為規(guī)范方面的培訓(xùn)^[9]；二是人員生產(chǎn)操作的規(guī)范性，關(guān)注 B 級潔凈區(qū)生產(chǎn)人員的站姿、坐姿和行走速度以及物品由 B 級背景轉(zhuǎn)移至 A 級區(qū)時的消毒情況等；三是潔凈服的管理，是否將退更后的潔凈服與未使用過的潔凈服分開存放，潔凈服是否合身、潔凈口罩和鞋套是否編號等；四是確認(rèn)與驗(yàn)證情況，是否定期對進(jìn)入 B 級區(qū)的人員進(jìn)行更衣確認(rèn)、潔凈服的滅菌效果及使用次數(shù)驗(yàn)證等。人員的培訓(xùn)及考核、意識和行為規(guī)范問題是疫苗生產(chǎn)企業(yè)乃至許多藥品生產(chǎn)企業(yè)存在的共性問題，需要引起檢查人員的關(guān)注。

3.2設(shè)備與組件污染控制

為最大限度的減少設(shè)備和組件帶來的污染，企業(yè)必須建立詳細(xì)的操作規(guī)程，規(guī)定設(shè)備與組件的使用、清潔、消毒、滅菌、維護(hù)保養(yǎng)及維修的方法，并開展必要的驗(yàn)證。設(shè)備與組件既包括直接投入生產(chǎn)的設(shè)備，還包括公用系統(tǒng)、生產(chǎn)輔助設(shè)備、一次性使用系統(tǒng)、容器與密封件等^[9]。設(shè)備與組件污染控制需要關(guān)注：一是設(shè)備的使用和清潔情況，如灌裝線最難清潔位置的評估、清潔操作規(guī)程是否詳細(xì)等；二是設(shè)備的預(yù)防性維護(hù)和維修情況，如是否將關(guān)鍵生產(chǎn)設(shè)備反復(fù)出現(xiàn)的故障納入到預(yù)防性維護(hù)計(jì)劃并儲備了備件。三是 O-RABS 手套、硅膠管、PP 桶等生產(chǎn)配件使用壽命的確認(rèn)情況，使用壽命的確認(rèn)應(yīng)當(dāng)兼顧使用時間和使用次數(shù)。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，設(shè)備的自動化水平越來越高，一方面減少了人源污染，另一方面，也對設(shè)備的維保和維修帶來新的挑戰(zhàn)，企業(yè)應(yīng)當(dāng)科學(xué)制定維護(hù)保養(yǎng)計(jì)劃，與供應(yīng)商建立良好的合作機(jī)制，盡可能的避免因設(shè)備故障帶來的污染風(fēng)險。

3.3物料污染控制

從毒種制備到成品包裝，物料貫穿疫苗生產(chǎn)的全過程，企業(yè)應(yīng)建立物料接收、取樣、檢驗(yàn)、放行、轉(zhuǎn)運(yùn)、消毒等各個環(huán)節(jié)的操作規(guī)程以及與生產(chǎn)工藝相適應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以控制物料引入的污染^[9]。物料的污染控制檢查要點(diǎn)有：一是委托檢驗(yàn)管理情況，如是否對委托檢驗(yàn)報(bào)告進(jìn)行審核；是否將具備自檢能力的項(xiàng)目委外檢驗(yàn)；二是物料使用情況，如是否按照先進(jìn)先出、近效期先出原則放行物料；三是物料轉(zhuǎn)運(yùn)時的包裝方式，如進(jìn)入 A/B 級區(qū)域的物料是否僅為一層包扎等。物料污染控制需要質(zhì)量管理部門和生產(chǎn)部門通力協(xié)作，建議企業(yè)采用電子化手段(如 WMS 系統(tǒng))進(jìn)行管理。

3.4設(shè)施環(huán)境污染控制

疫苗生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)基于產(chǎn)品的特性和潔凈度級別要求對設(shè)施環(huán)境進(jìn)行合理設(shè)計(jì)、布局、驗(yàn)證、使用與維護(hù)。環(huán)境監(jiān)測作為確認(rèn)潔凈環(huán)境持續(xù)符合要求的重要手段，是近年來歷次檢查的重點(diǎn)，需要關(guān)注：監(jiān)測點(diǎn)位的數(shù)量和位置、監(jiān)測項(xiàng)目、監(jiān)測頻次；環(huán)境微生物的警戒限度與行動限度、環(huán)境監(jiān)測異常情況的調(diào)查和處理措施等^[9]。此外，設(shè)施方面應(yīng)注意潔凈區(qū)設(shè)施的設(shè)計(jì)和安裝的合理性，如監(jiān)控探頭、滅蠅燈、水電管路、電源插座、水池、門把手等設(shè)施應(yīng)當(dāng)盡量簡潔，避免形成衛(wèi)生死角；空調(diào)凈化系統(tǒng)(HVAC)的維護(hù)情況，應(yīng)定期對空調(diào)凈化系統(tǒng)(HVAC)進(jìn)行消毒、再驗(yàn)證等。

3.5清潔驗(yàn)證

清潔是消除污物，控制污染最直接的手段，與設(shè)備污染、設(shè)施環(huán)境污染等的發(fā)生有直接的關(guān)聯(lián)。清潔驗(yàn)證是證明清潔方法可行、有效最直接的方式，鑒于疫苗生產(chǎn)工藝的復(fù)雜性，清潔驗(yàn)證需重點(diǎn)關(guān)注：一是對最差條件進(jìn)行充分評估，綜合考慮產(chǎn)品毒性、溶解性、生產(chǎn)批量及批次、設(shè)備大小和形狀、表面粗糙程度、材質(zhì)是否容易清潔、是否存在不易清潔的管徑及死角部位、是否存在多品種共線等因素；二是開展清潔劑和消毒劑驗(yàn)證，消毒劑消毒效力驗(yàn)證應(yīng)包含藥典規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株和環(huán)境分離菌、表面試驗(yàn)法應(yīng)開展中和劑鑒定試驗(yàn)等；三是清潔方法要與清潔驗(yàn)證的方法一致，依據(jù)消毒劑驗(yàn)證結(jié)果在操作規(guī)程中制定消毒最短時間等。此外，清潔驗(yàn)證的殘留目標(biāo)物選擇、取樣方法和取樣點(diǎn)、分析方法驗(yàn)證、檢測結(jié)果和限度也是需要關(guān)注的內(nèi)容^[10]。 

Part 4 結(jié)語

CCS 不是一份簡單的質(zhì)量管理程序文件，其建立需要全面的技術(shù)和工藝知識，需要多個部門協(xié)同溝通，基于產(chǎn)品和工藝以及微生物相關(guān)知識，與現(xiàn)有的變更、偏差、質(zhì)量投訴以及年度回顧等管理工具相關(guān)聯(lián)，形成一套文件和記錄系統(tǒng)，并隨著對產(chǎn)品認(rèn)識的加深，定期進(jìn)行回顧和更新，對污染控制措施進(jìn)行持續(xù)改進(jìn)^[11]。隨著我國與國際藥品監(jiān)管體系的不斷深入，CCS 理念已在國內(nèi)藥品行業(yè)掀起一股熱潮，疫苗作為國家重點(diǎn)監(jiān)管品種，生產(chǎn)企業(yè)更應(yīng)主動履行質(zhì)量安全主體責(zé)任，早日完善 CCS 體系，進(jìn)一步提升生產(chǎn)和質(zhì)量管理水平。同時，作為藥品監(jiān)管和檢查人員，也需不斷學(xué)習(xí)國內(nèi)外 CCS 相關(guān)法規(guī)指南，努力提升自己的檢查能力，為疫苗安全持續(xù)護(hù)航。

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