近年來(lái)中藥制劑的發(fā)展比較迅速，但在純中藥制劑中添加化學(xué)藥，嚴(yán)重違反了國(guó)家法規(guī)，威脅患者的健康。如治療男性性功能障礙的“純中藥”中加進(jìn)“西地那非”；在減肥藥中加進(jìn)西布曲明或能導(dǎo)致人出現(xiàn)甲亢癥狀的甲狀腺激素等。因此必須建立快速、靈敏、可靠的分析檢測(cè)方法，為純中藥制劑驗(yàn)明正身。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC／MS)法以其高專(zhuān)屬性的上風(fēng)廣泛應(yīng)用于藥物的定性檢測(cè)中，本文建立了LC／MS法用于檢測(cè)純中藥降糖藥物中是否非法摻人化學(xué)降糖藥物格列本脲。格列本脲為第二代磺酰脲類(lèi)藥物，若用量把握不當(dāng)，極易發(fā)生低血糖癥。

 

1、儀器與試藥

 

美國(guó)Finnigan公司LCQ型液相色譜(質(zhì)譜聯(lián)用儀，包括電噴霧離子源(ESI)以及LCQ數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，并配有直接進(jìn)樣用注射泵和250μL進(jìn)樣器；日本島津公司HPLC系統(tǒng)(包括LC一10AD泵，Rheodyne7125進(jìn)樣閥)。

 

格列本脲對(duì)照品(純度為99.5％，沈陽(yáng)藥科大學(xué)藥劑教研室)；6種純中藥降糖藥物(遼寧省藥品檢驗(yàn)所提供，分別為不同廠家6個(gè)批次：20030108，200203O2，20020601，010401，20020621和20010313)；甲醇，乙腈(色譜純，天津市康科德科技有限公司)，甲酸(分析純，天津市博迪化工有限公司)，水為二次重蒸水。

 

2、實(shí)驗(yàn)方法

 

2.1 色譜條件色譜柱：ZorbaxEclipseXDB-C8柱(5μm粒徑，150×4.6mm，Agilent)；活動(dòng)相：乙腈-水-甲酸(70：30：1)；流速：O.5mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量5OμL。

 

2.2 質(zhì)譜條件電噴霧離子源，正離子檢測(cè)，離子源噴射電壓：4.50kV；毛細(xì)管溫度：200℃；毛細(xì)管電壓：6.25V；鞘氣流速：1.05L/min；輔助氣流速：O.15L/min；檢測(cè)方式：一級(jí)全掃描方式、二級(jí)全掃描方式、三級(jí)全掃描方式和選擇離子監(jiān)測(cè)方式(SIM)。

 

2.3 格列本脲標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精密稱(chēng)取一定量的對(duì)照品置容量瓶中加人活動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，使?jié)舛葹?00μg/mL。

 

2.4 受試溶液的配制取不同批號(hào)的被試膠囊各10粒，取出內(nèi)容物分別混勻，將相當(dāng)于1粒膠囊內(nèi)容物重量的樣品分別置10mL具塞玻璃試管中，加進(jìn)3mL甲醇，渦流2min，超聲20min，離心10min，取上清液用于分析測(cè)定。

 

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

 

3.1 格列本脲的色譜和質(zhì)譜行為采用正離子檢測(cè)方式對(duì)格列本脲對(duì)照品進(jìn)行LC／MS分析，其保存時(shí)間為6.4min；多級(jí)質(zhì)譜分析結(jié)果，在一級(jí)全掃描質(zhì)譜分析中產(chǎn)生的準(zhǔn)分子離子[M H] 峰為m／z494，[M Na] 峰為m／z516，[2M H] 峰為m／z987，[2M Ma] 峰為m／zlO09，在二級(jí)全掃描質(zhì)譜分析中，分子中胍基左側(cè)的酰胺鍵斷裂產(chǎn)生m／z369的碎片離子，進(jìn)一步對(duì)m／z369進(jìn)行三級(jí)全掃描質(zhì)譜分析，主要產(chǎn)生左側(cè)酰胺鍵斷裂天生的碎片離子m／z169，總結(jié)其裂解途徑，為實(shí)際樣品中化合物的鑒定提供了可靠的依據(jù)。

 

3.2 待測(cè)樣品的檢測(cè)結(jié)果在相同的色譜及質(zhì)譜條件下對(duì)6種純中藥制劑的甲醇提取液進(jìn)行LC／MS分析，均檢測(cè)到色譜行為與格列本脲對(duì)照品相同的化合物，而且在相應(yīng)的一級(jí)全掃描質(zhì)譜分析中檢測(cè)到與格列本脲相同的準(zhǔn)分子離子m／z494；為進(jìn)一步確定所檢測(cè)到化合物的結(jié)構(gòu)，對(duì)其進(jìn)行多級(jí)質(zhì)譜分析，該化合物的二級(jí)及三級(jí)全掃描質(zhì)譜與格列本脲對(duì)照品完全相同，由此可以證實(shí)在6種被試中藥降糖藥物中所檢測(cè)到的化合物為化學(xué)藥格列本脲。

 

4、討論

 

文獻(xiàn)中對(duì)格列本脲的檢測(cè)方法有紫外檢測(cè)法、熒光檢測(cè)法和質(zhì)譜檢測(cè)法。中藥制劑中通常都含有多種中藥材，每種藥材中均含有多種組分，采用紫外檢測(cè)法或熒光檢測(cè)法對(duì)中藥提取液進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，由于選擇性不強(qiáng)，在干擾組分多的情況下，對(duì)待測(cè)物的色譜分離提出了更高的要求，因此可能會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。本文采用LC／MS技術(shù)，將高效液相色譜的高分離能力與質(zhì)譜分析的高選擇性相結(jié)合，對(duì)純中藥制劑中非法摻進(jìn)的化學(xué)降糖藥格列本脲進(jìn)行多級(jí)質(zhì)譜分析，對(duì)其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確證，增強(qiáng)了檢測(cè)結(jié)果的可信度。該法靈敏度高，選擇性強(qiáng)，對(duì)該中藥制劑的質(zhì)量控制具有現(xiàn)實(shí)意義。