利用指示生物的生理生化反應(yīng)來判斷農(nóng)藥殘留及其污染情況。例如，可以用實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)的敏感性家蠅為測(cè)定材料，以其接觸待測(cè)樣品后的中毒程度來表示該樣品中的殺蟲劑殘留；以病菌生長(zhǎng)受抑制的程度來檢測(cè)殺菌劑的殘留，以玉米或其它指示植物根長(zhǎng)受抑制的程度來檢測(cè)土壤中磺酰脲類除草劑殘留等。該方法無需對(duì)樣品前處理比較簡(jiǎn)單快速或無需進(jìn)行前處理，但對(duì)指示生物要求較高，測(cè)定結(jié)果不能確定農(nóng)藥品種，并且可能出現(xiàn)假陽性或假陰性的情況，該方法可作為快速檢驗(yàn)方法用于農(nóng)產(chǎn)品引起中毒或在現(xiàn)場(chǎng)使用。

02 農(nóng)藥殘留的理化檢測(cè)

用于農(nóng)藥殘留的化學(xué)檢測(cè)方法有分光光度法、極譜法、原子吸收光譜法、薄層層析法、氣相色譜法、液相色譜法、同位素標(biāo)記法、核磁共振波譜法、色質(zhì)聯(lián)用法等。自二十世紀(jì)九十年代以來，現(xiàn)代化學(xué)分析技術(shù)日新月異，許多新技術(shù)已進(jìn)入實(shí)用階段，如毛細(xì)管電脈儀技術(shù)（CZE），色質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（GC-MS、HPLC-MS）超臨界流體色譜技術(shù)（SFC），直接光譜分析技術(shù)等。這些新技術(shù)的應(yīng)用，大大提高農(nóng)藥殘留分析的靈敏度，簡(jiǎn)化分析步驟，提高了分析效率。但是，這些分析方法有的靈敏度不高，如分光光度法、薄層層析法等。有的需要昂貴的儀器，如色質(zhì)聯(lián)用法、核磁共振波譜法等。還有的需要特殊的設(shè)備，如同位素標(biāo)記法等。因此，目前，普遍采用的還是氣相色譜法和液相色譜法，它們具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏以及穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好，線性范圍寬、耗資低等優(yōu)點(diǎn)。

（1）氣相色譜法（GC）

采用氣體作流動(dòng)相的色譜法，用于揮發(fā)性農(nóng)藥的檢測(cè)，具有高選擇性、高分離效能、高靈敏度、快速和特點(diǎn)，是農(nóng)藥殘留量檢測(cè)最常用的方法之一，目前用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)的檢測(cè)器主要有電子捕獲檢測(cè)器（ECD）、微池電子捕獲檢測(cè)器（u-ECD）、火焰光度檢測(cè)器（FPD）、脈沖火焰光度檢測(cè)器（P-FPD）、氮磷檢測(cè)器（NPD）等。

（2）液相色譜法（HPLC）

采用液體作流動(dòng)相的一種色譜法，它可以分離檢測(cè)極性強(qiáng)、分子量大及離子型農(nóng)藥，可用于不易氣化或受熱易分解的農(nóng)藥的檢測(cè)。近年來，采用新型高效固定相、高壓泵和高靈敏度的檢測(cè)器，柱前和柱后衍生技術(shù)、以及計(jì)算機(jī)聯(lián)用等，大大提高了檢測(cè)效率、靈敏度、速度和操作自動(dòng)化程度。目前用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)最多是紫外吸收檢測(cè)器（UV）、兩極管陣列檢測(cè)器（DAD）和熒光檢測(cè)器（FLD）。

（3）色質(zhì)聯(lián)用法（GC-MS，HPLC-MS）

氣相或液相與質(zhì)譜聯(lián)用，它既具備了色譜的高分離效能優(yōu)點(diǎn)，而且具備了質(zhì)譜準(zhǔn)確鑒定化合物結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，可同時(shí)達(dá)到定性、定量的檢測(cè)目的，特別適合于農(nóng)藥代謝物、降解物的檢測(cè)和多殘留檢測(cè)等，不過此法需要貴重儀器且操作繁雜困難，不適合于經(jīng)常性的檢測(cè)。一般可用來做最后的確認(rèn)工作。

（4）超臨界流體色譜（SFC）

是以超臨界流體作為流動(dòng)相的色譜體系，超臨界流體是指物質(zhì)處于臨界溫度和臨界壓力時(shí)的狀態(tài)，介于氣、液態(tài)之間，兼有氣體和液體的某些物理特性，因此，超臨界流體色譜既有氣譜的快速、高效、靈敏的特點(diǎn)，又有能檢測(cè)對(duì)熱不穩(wěn)定和大分子化合物的液譜的特點(diǎn)。

（5）毛細(xì)管電泳法（CE）

該方法是利用毛細(xì)管及高電壓（15-30KW）分離各種農(nóng)藥殘留物，非常適合于一些難于用傳統(tǒng)色譜法分離的離子化樣品的分離和分析，比HPLC有高10-1000倍的分析能力，而且所需之緩沖液具有不危害環(huán)境之特點(diǎn)，在短時(shí)間（30分鐘）內(nèi)就可以完成定性及定量分析。

03 常用農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)方法

（1）酶抑制法：

有機(jī)磷與氨基甲酸酯農(nóng)藥共為神經(jīng)系統(tǒng)乙酰膽堿脂酶抑制物，因此可以利用農(nóng)藥靶標(biāo)酶-乙酰膽用堿酯酶（AChE）受抑制的程度來檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥。該方法目前已開發(fā)出了相應(yīng)的各種速測(cè)卡和速測(cè)儀。該方法檢測(cè)時(shí)，蔬菜中的水份、碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂等物質(zhì)不會(huì)對(duì)農(nóng)藥殘留物的檢測(cè)造成干擾，不必進(jìn)行分離去雜，節(jié)省了大量預(yù)處理時(shí)間，從而能達(dá)到快速檢測(cè)的目的，因此該方法具有快速方便、前處理簡(jiǎn)單、無需儀器或儀器相對(duì)簡(jiǎn)單，適用于現(xiàn)場(chǎng)的定性和半定量測(cè)定，目前的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)就是用了該方法，已上升為農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。但該方法只能用于測(cè)定有機(jī)磷和氨基甲酸酯類殺蟲劑，其靈敏度和所使用的酶、顯色反應(yīng)時(shí)間和溫度密切相關(guān)，經(jīng)酶法檢測(cè)出陽性后，需用標(biāo)準(zhǔn)儀器檢驗(yàn)方法進(jìn)一步檢測(cè)，以鑒定殘留農(nóng)藥品種及準(zhǔn)確殘留量。

（2）免疫分析法：

有放射性免疫分析、酶免疫分析、多組份分析物免疫分析、免疫傳感器分析等。最為常用的是酶聯(lián)免疫法（ELISA法），它主要是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法。該法利用化學(xué)物質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)能產(chǎn)生免疫抗體的原理，先將小分子農(nóng)藥化合物與大分子生物物質(zhì)結(jié)合成大分子，做成抗原，并使之在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生抗體，對(duì)抗體篩選制成試劑盒，通過抗原與抗體之間發(fā)生的酶聯(lián)免疫反應(yīng)，依靠比色來確定農(nóng)藥殘留，它具有專一性強(qiáng)、靈敏度高、快速、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，試劑盒可廣泛用于現(xiàn)場(chǎng)樣品和大量樣品的快速檢測(cè)，可準(zhǔn)確定性、定量。但由于受到農(nóng)藥種類多，抗體制備難度大、在不能肯定樣本中的農(nóng)藥殘留種類時(shí)檢測(cè)有一定的盲目性以及抗體依賴國(guó)外進(jìn)口等影響，酶聯(lián)免疫法的應(yīng)用范圍受到較大的限制，目前，我國(guó)市場(chǎng)上酶聯(lián)免疫法成品試劑盒依賴從國(guó)外進(jìn)口。

（3）化學(xué)法—速測(cè)靈法

“速測(cè)靈”法應(yīng)用的原理是具有強(qiáng)催化作用的金屬離子催化劑，使各類有機(jī)磷農(nóng)藥（磷酸酯、二硫代酸酯、磷酸胺）在催化作用下水解為磷酸與醇，水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，使顯色劑的紫紅色退去變成無色。主要針對(duì)的是有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留檢測(cè)，特別是甲胺磷、對(duì)硫磷農(nóng)藥。這種方法采用化學(xué)反應(yīng)原理，避免了通常所使用生化方法（酶法）的缺點(diǎn)（酶的制備、保存以及反應(yīng)需比較嚴(yán)格的條件），靈敏度也達(dá)到一定的要求。但是此方法主要針對(duì)的是甲胺磷、對(duì)硫磷等較高毒性的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的定性檢測(cè)。