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今日分享內(nèi)容：脂肪酸和反式脂肪酸檢測常見問題解答
《GB 5009.168-2016 食品安全國家標準 食品中脂肪酸的測定》
《GB 5009.257-2016 食品安全國家標準 食品中反式脂肪酸的測定》
一、《GB 5009.168-2016 食品安全國家標準 食品中脂肪酸的測定》
01
脂肪酸甲酯和脂肪酸甘油三酯標準品如何選擇？
國標《GB 5009.168-2016 食品安全國家標準 食品中脂肪酸的測定》按照定量方法分為三個方法，分別是內(nèi)標法、外標法和歸一化法。內(nèi)標法需要使用37種脂肪酸甲酯混標作為定性外標，十一碳酸甘油三酯作為定量內(nèi)標；外標法需要使用相應(yīng)的脂肪酸甘油三酯作為定量外標；歸一化法需要使用37種脂肪酸甲酯混標作為定性外標。
02
37種脂肪酸甲酯混標如何使用，
內(nèi)標法如何配置標準曲線？
從國標GB 5009.168-2016的截圖，可以看出，內(nèi)標法需要配置5mg/mL十一碳酸甘油三酯的內(nèi)標溶液；而混合脂肪酸甲酯標液不需要配置標準曲線，僅用于定性和脂肪酸甲酯響應(yīng)因子的計算。
如果選購37種脂肪酸甲酯混合標液（不同濃度于異辛烷，總計10 mg/mL），建議取1.0mL 混合標液稀釋至5mL或10mL，得到總計2mg/mL或1mg/mL的37種脂肪酸甲酯混合標準使用液。
脂肪酸甲酯混標的作用主要是用來計算脂肪酸甲酯相對十一碳酸甲酯的響應(yīng)因子，因此進樣單點的標準溶液即可；樣品中脂肪酸甲酯的含量計算主要取決于樣品中添加的十一碳酸甲酯內(nèi)標的含量和樣品中各脂肪酸甲酯的峰面積及其響應(yīng)因子。樣品中脂肪酸的含量需要由脂肪酸甲酯的含量再乘以轉(zhuǎn)換系數(shù)得到。
03
使用CD-2560進樣37種脂肪酸甲酯為什么只出了36個峰？
不同品牌、不同規(guī)格的色譜柱，色譜柱污染、柱效下降的色譜柱都可能導(dǎo)致37種脂肪酸的分離有所變化，建議可通過調(diào)整流速等參數(shù)優(yōu)化色譜條件，以達到最優(yōu)分離度。
建議先在0.8mL/min 的流速條件下查看目標峰的分離情況，根據(jù)出峰情況，如果是31號和32號峰分離變差就增加流速，如果是24號峰、30號峰和35號峰分離變差就減小流速，通過流速的微調(diào)以找到最優(yōu)的分離條件。具體調(diào)整方法可查看安譜實驗相關(guān)的單頁“37種脂肪酸甲酯分離的小秘密，你知道嗎？”。
04
外標法檢測有哪些需要注意？
外標法使用脂肪酸甘油三酯作為標準品，但需要將脂肪酸甘油三酯標準溶液經(jīng)過酯交換轉(zhuǎn)變?yōu)橹舅峒柞ド蠙C檢測，不可直接將脂肪酸甘油三酯直接上機檢測，也不可使用脂肪酸甲酯作為外標進行定量計算。
外標法是直接計算樣品中脂肪酸的含量，不需要計算脂肪酸甲酯的含量。通過脂肪酸甘油三酯的單點外標法進行計算，計算結(jié)果主要與脂肪酸甘油三酯標準溶液的濃度、脂肪酸甲酯的峰面積和脂肪酸甘油三酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的系數(shù)有關(guān)。脂肪酸甘油三酯標準溶液濃度的選擇可根據(jù)實際樣品中脂肪酸的含量進行優(yōu)化調(diào)整，使其盡量接近樣品中含量。
二、《GB 5009.257-2016 食品安全國家標準 食品中反式脂肪酸的測定》
01
要檢測哪些反式脂肪酸，標準品怎么選擇？
標準要求檢測食品中C16:1t~C22:1t等16種反式脂肪酸。具體目標物信息可參見標準附錄A中的“表A.1 脂肪酸甲酯化學(xué)信息表”。
針對標準要求的反式脂肪酸，推薦的標準品選擇見下表，分別是6種反式單不飽和脂肪酸甲酯、4種十八碳二烯酸甲酯、8種十八碳三烯酸甲酯。
02
反式脂肪酸標品的使用有些什么注意點？
上述推薦的3種反式脂肪酸標準品中十八碳二烯酸甲酯和十八碳三烯酸甲酯均為同分異構(gòu)體混合物形式，均無準確濃度，這是反式脂肪酸的性質(zhì)及其生產(chǎn)工藝導(dǎo)致，但這并不影響結(jié)果的計算，因為標準中反式脂肪酸的定量方法是面積歸一化法，并不需要確定某一個反式脂肪酸的準確濃度，此標準品更重要的作用是目標物的定性。
4種十八碳二烯酸甲酯混標和8種十八碳三烯酸甲酯混標中的目標物信息見下表，可以看出2個混標中分別含有順-9,12-十八碳二烯酸甲酯（亞油酸甲酯）和順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（亞麻酸甲酯）這兩種順式脂肪酸甲酯。因此推薦的3種混標產(chǎn)品中總共含有18個目標物。
03
檢測食品中反式脂肪酸
還需要檢測其他常見脂肪酸嗎？
檢測食品中的反式脂肪酸需要同時檢測其他順式脂肪酸，反式脂肪酸的定量計算是使用歸一化法，從公式可以看出需要計算樣品中所有脂肪酸甲酯目標物的校準峰面積。通常建議可以和《GB 5009.168-2016 食品安全國家標準 食品中脂肪酸的測定》同時檢測，因此檢測食品中反式脂肪酸還需要采購37種脂肪酸甲酯混標進行檢測。
需要注意的是“GB 5009.168-2016”和“GB 5009.257-2016”兩個標準中脂肪酸的歸一化法的計算公式是并不一樣，在實際檢測過程中需要分別參照標準要求的公式進行計算。
04
標準品中有一些脂肪酸甲酯的CAS號和標準不一樣？
因不飽和脂肪酸甲酯存在順反異構(gòu)，以及順反物質(zhì)的混合物，因此可能設(shè)計多個CAS號，所以需要對標準品的CAS號信息特別注意。特別是“GB 5009.257-2016”中的CAS號信息情況，詳見下表，而在“GB 5009.168-2016”中目標物的CAS號信息均正確無誤，各位老師可以結(jié)合“GB 5009.168-2016”進行目標物CAS號信息的確認。
05
有一些反式脂肪酸和順式脂肪酸分離度較差怎么優(yōu)化？
在脂肪酸檢測過程中常常遇到的一個問題是，順式脂肪酸 C18:3 6c,9c,12c 和一些反式十八碳三烯酸為同分異構(gòu)體，且在色譜柱上出峰時間完成重合，無法分離，這樣就會導(dǎo)致如果樣品中有出峰，則無法判定該目標物是反式和順的結(jié)構(gòu)，影響結(jié)果判定。
