一、目的與原理：

1、了解掌握單指示劑與雙指示劑甲醛滴定法測氨基酸總量的方法與原理：

   二、單指示劑甲醛滴定法：

   (一)原理：氨基酸具有酸、堿兩重性質(zhì)，因為氨基酸含有-COOH基顯示酸性，又含有-NH₂基顯示堿性。由于這二個基的相互作用，使氨基酸成為中性的內(nèi)鹽。當(dāng)加入甲醛溶液時，-NH₂與甲醛結(jié)合，其堿性消失，破壞內(nèi)鹽的存在，就可用堿來滴定-COOH基，以間接方法測定氨基酸的量，反應(yīng)式可能以下面三種形式存在。

（二）試劑

(1)40％中性甲醛溶液，以麝香草酚酞為指示劑，用1N NaOH溶液中和。

(2)0.1％麝香草酚酞乙醇溶液。

(3)0.100N氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。

(三)操作步驟：

稱取一定量樣品(約含20毫克左右的氨基酸)于燒杯中(如為固體加水50毫升)，加2-3滴指示劑，用0.1OON NaOH溶液滴定至淡藍(lán)色。加入中性甲醛20毫升，搖勻，靜置1分鐘，此時藍(lán)色應(yīng)消失。再用0.1OON NaOH溶液滴定至淡藍(lán)色。記錄兩次滴定所消耗的堿液毫升數(shù)，用下述公式計算

計算：

        氨基酸態(tài)氮(％)=( N V×0.014×100)/W                                

式中：

N：NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液當(dāng)量濃渡。

V：NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗的總量(m1)

W：樣品溶液相當(dāng)樣品重量(克)。

0.014：氮的毫克當(dāng)量。

三、雙指示劑甲醛滴定法：

(一)原理：

與單色法相同，只是在此法中使用了兩種指示劑。從分析結(jié)果看，雙指示劑甲醛滴定法與亞硝酸氮氣容量法(此法操作復(fù)雜，不作介紹)相近單色滴定法稍偏低，主要因為單指示劑甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作為麝香草酚酞的終點。PH值在9.2，而雙指示劑是以氨基酸溶液的PH值作為中性紅的終點，PH值為7.0，從理論計算看，雙色滴定法較為準(zhǔn)確。

    (二)試劑：

    (1)三種試劑同單指示劑法

    (2)0.1％中性紅(50％乙醇溶液)

    (三)操作步驟：

    取相同的兩份樣品，分別注入100毫升三角燒瓶中，  一份加入中性紅指示劑2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定終點(由紅變琥珀色)，記錄用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，搖勻，以0.100NNaOH準(zhǔn)溶液滴定至淡藍(lán)色。按下述公式計算。  

計算：   

氨基酸態(tài)氮(％)=( N(V₂-V₁)×0.014)/W×100

式中：

V₂：用麝香草酚酞為指示劑時標(biāo)準(zhǔn)堿液消耗量(毫升)

V₁：用中性紅作指示劑時堿液的消耗量(m1)。

N：標(biāo)準(zhǔn)堿液當(dāng)量濃度。

W：樣品的重量(克)。．

0.014：氮的毫克當(dāng)量。

注意事項：

測定時樣品的顏色較深，應(yīng)加活性炭脫色之后再滴定．