第一法索氏抽提法是脂肪測定的經(jīng)典方法。根據(jù)其原理為脂肪易溶于有機溶劑。試樣直接用無水乙醚或石油醚等溶劑抽提后,蒸發(fā)除去溶劑,干燥,得到游離態(tài)脂肪的含量。因此這個方法適用于脂肪含量較高、結(jié)合態(tài)脂肪較少、易于提取的食品。如水果、蔬菜及其制品、糧食及糧食制品、肉及肉制品、蛋及蛋制品、水產(chǎn)及其制品、焙烤食品、糖果等食品中游離態(tài)脂肪含量的測定。

第二法酸水解法測定的是樣品中游離態(tài)脂肪和結(jié)合態(tài)脂肪的總和，屬于總脂肪，因此在相同產(chǎn)品的情況下，檢測結(jié)果一般會比第一法略高。但由于在熱強酸條件下，糖類物質(zhì)易發(fā)生碳化，磷脂易分解為脂肪酸和堿，因此酸水解法不適用于高糖或高磷脂的樣品。適用于水果、蔬菜及其制品、糧食及糧食制品、肉及肉制品、蛋及蛋制品、水產(chǎn)及其制品、焙烤食品、糖果等食品中游離態(tài)脂肪及結(jié)合態(tài)脂肪含量的測定.此法適用范圍較廣，對于特殊樣品如肉制品、淀粉等有不同的稱樣量和操作要求。

第三法和第四法的適用范圍看似一致，但從取樣量不難發(fā)現(xiàn)，第三法堿水解法適用于幾乎所有液態(tài)乳及固態(tài)乳，其檢測方法的復(fù)雜性和精準(zhǔn)度都比第四法要高，用時也相對較長。

第四法蓋勃法僅適用于液態(tài)乳，或者是沖調(diào)后的固態(tài)乳，其檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度較第三法要低。但此法操作簡便，用時少，適用于液態(tài)乳的批量和快速測定。

食品檢測機構(gòu)的日常檢測中，對乳及乳制品中脂肪的測定普遍采用第三法堿水解法；而在乳品生產(chǎn)企業(yè)使用的更多的卻是第四法蓋勃法。

原因在于第三法適用范圍更廣，結(jié)果準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性更好；第四法則是耗時少，有機試劑使用少，適合生產(chǎn)過程中快速檢測。

今天我們一起先學(xué)習(xí)一下第四法吧！

在乳中加入硫酸破壞乳膠質(zhì)性和覆蓋在脂肪球上的蛋白質(zhì)外膜，離心分離脂肪后讀取其體積即為脂肪含量。

于蓋勃氏乳脂計中加入10mL硫酸，再緩慢加入10.75mL試樣，然后加入1mL異戊醇，塞上橡皮塞，使瓶口向下，同時用布包裹以防沖出，用力振搖均勻，靜置數(shù)分鐘（瓶口向下），置65-70℃中水浴5min，取出后置于乳脂離心機中以1100r/min離心5分鐘，再置于65-70℃水浴中保溫5min后取出，立即讀數(shù)，即得脂肪百分?jǐn)?shù)。

 ❶ 硫酸的濃度要嚴(yán)格遵守標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，過少則酪蛋白不能完全破壞，使測定值偏低或脂肪層渾濁；而過多則易導(dǎo)致炭化，顏色發(fā)黑而影響讀數(shù)，實際使用中90%的硫酸可以減少炭化。

 ❷ 加入硫酸的目的是破壞乳脂球膜，使脂肪游離出來；同時也增加了下層液體密度，密度較低的脂肪更易浮出，從而方便讀數(shù)。

 ❸ 異戊醇的作用是防止糖的炭化，促使脂肪析出，并降低乳脂球的表面張力，以利于形成脂肪層。

1mL異戊醇應(yīng)能完全溶于酸中，但由于質(zhì)量不純，可能有部分析出摻入到油層，而使結(jié)果偏高。因此在使用未知規(guī)格的異戊醇之前，應(yīng)先何做試驗，其方法如下：

將硫酸、水（代替牛乳）及異戊醇按測定樣品時的數(shù)量注入乳脂計中，振搖后靜置24小時澄清，如在乳脂計的上部狹長部分無油層析出，認(rèn)為適用，否則表明異戊醇質(zhì)量不佳，不能采用。

 ❹ 水浴和離心的目的為加速脂肪析出。

 ❺ 水浴完成必須立即讀數(shù)，這是因為脂肪在65℃時的相對密度約為0.9，恰好是蓋勃乳脂計刻度的設(shè)計。

 ❻ 蓋勃法所用移液管為何為10.75mL？

這是因為乳品的脂肪含量在2.64%-4.88%的時候，蓋勃法移取10.75mL乳品測定脂肪和國標(biāo)方法偏差最小，僅有±0.02%，而天然乳品的脂肪含量大都在2.64%-4.88%區(qū)間，這對于蓋勃法來說是非常實用的。