臍帶內(nèi)皮細(xì)胞的分離

⑴?臍帶收集：用無(wú)菌止血鉗夾閉臍帶兩端，在止血鉗外側(cè)剪斷臍帶，放入盛有4℃Cord Buffer的飯盒內(nèi)。臍帶在4℃放置不應(yīng)超過(guò)24小時(shí)。
⑵ 臍帶內(nèi)皮細(xì)胞分離
　　帶無(wú)菌手套，取出臍帶，在止血鉗內(nèi)側(cè)用碘酒和酒精棉球消毒后，用無(wú)菌剪刀將兩端臍帶剪除。
　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
在臍帶一端找到靜脈，插入臍帶靜脈插管，用2根粗絲線(xiàn)扎牢，用Cord Buffer抽吸有的30ml注射器沖洗靜脈腔，至將臍血洗凈。
　　　　　　 　　　　　　 　　　　　↓
　　 趕出靜脈腔內(nèi)殘余液體，將臍帶另一端用止血鉗夾閉，用10ml注射器連接針頭，注入37℃預(yù)熱的0.1％膠原酶約6-8ml，放入37℃Cord Buffer中保溫6-10min
　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　吸出靜脈腔內(nèi)膠原酶所消化的細(xì)胞懸液，加入預(yù)加有20mlcordBuffer的離心管中，沖洗靜脈腔，一并加入離心管中。
　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
離心，1500rpm,10min棄上清，用5～7ml 20％FCS，RPMT 1640重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶，放5％CO2孵箱