愈傷組織和試管苗的培養(yǎng)

愈傷組織和試管苗的培養(yǎng)
 
愈傷組織的培養(yǎng) 一般來(lái)說(shuō)，從接種外植體到出現(xiàn)愈傷組織，需要經(jīng)過(guò)2周時(shí)間。2周之內(nèi)就可以看到外植體上逐漸長(zhǎng)出乳白色或黃白色的瘤狀愈傷組織。首次培養(yǎng)愈傷組織時(shí)，恒溫箱的門(mén)應(yīng)該關(guān)閉，不必見(jiàn)光，因?yàn)樵跓o(wú)光條件下愈傷組織長(zhǎng)得更快。2周以后，由于培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分已接近耗盡，必須更換培養(yǎng)基，進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

愈傷組織的繼代培養(yǎng) 進(jìn)行繼代培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基，和培養(yǎng)愈傷組織所用的培養(yǎng)基相同。在嚴(yán)格的無(wú)菌條件下(接種箱內(nèi))將愈傷組織連同原來(lái)的外植體，一起移到新的培養(yǎng)基上。愈傷組織的繼代培養(yǎng)，一代為20 d。如果延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)會(huì)減少，外植體也會(huì)分泌一些有毒物質(zhì)，造成自身中毒。20 d以后，可以根據(jù)愈傷組織的大小，決定是繼續(xù)進(jìn)行繼代培養(yǎng)，還是進(jìn)行試管苗培養(yǎng)。如果愈傷組織長(zhǎng)到直徑為1～1?5 cm時(shí)，就可以進(jìn)行試管苗培養(yǎng)，否則還需要進(jìn)行第二次繼代培養(yǎng)。

在愈傷組織進(jìn)行繼代培養(yǎng)期間，可以將恒溫箱的門(mén)打開(kāi)，讓愈傷組織見(jiàn)光。愈傷組織見(jiàn)光后，顏色可以轉(zhuǎn)為綠色。

試管苗的培養(yǎng) 當(dāng)愈傷組織長(zhǎng)到一定大小后，可以更換培養(yǎng)基，進(jìn)行試管苗的培養(yǎng)。試管苗的培養(yǎng)分為生芽培養(yǎng)和生根培養(yǎng)。要想培育出一株完整的試管幼苗，必須先進(jìn)行生芽培養(yǎng)，然后進(jìn)行生根培養(yǎng)。如果順序顛倒，先誘導(dǎo)生根，就不好誘導(dǎo)生芽了。生芽大約需要4～6周的時(shí)間，而生根培養(yǎng)時(shí)，1周以后就可以見(jiàn)到幼根了。注意，試管苗應(yīng)該進(jìn)行見(jiàn)光培養(yǎng)。

下面列出繼代培養(yǎng)和試管苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方。①繼代培養(yǎng)和生芽培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方是：MS培養(yǎng)基 6BA(質(zhì)量濃度為0.5～1.0 mg/L) NAA(質(zhì)量濃度為0.1～0.15 mg/L)。即在1 L MS培養(yǎng)基中加入5～10 mL6BA和1～1.5 mL的NAA母液。NAA配合6BA，可以促進(jìn)不定芽的生長(zhǎng)。②生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方是：MS培養(yǎng)基 NAA(質(zhì)量濃度為0.1～0.5 mg/L)。即在1 L MS培養(yǎng)基中加入1～5 mL的NAA母液。NAA起促進(jìn)生根的作用。