1．原理 用Iodogen為氧化劑，對蛋白質(zhì)和多肽抗原進(jìn)行碘化標(biāo)記，把125I直接引進(jìn)分子中的酪氨酸殘基上。標(biāo)記過程中被標(biāo)記樣品不與Iodogen混合，標(biāo)記后取出樣品即停止反應(yīng)，不使用任何還原劑。
2．方法
�。�1）標(biāo)記之前，先把Iodogen溶于有機(jī)溶劑，涂于管底，并使之干燥。
�。�2）標(biāo)記時，將蛋白質(zhì)溶液10～20μg/10μl(0.5mol/L,pH7.5PB)置于反應(yīng)管中，反應(yīng)管置于冰浴中。碘化時，125I與蛋白質(zhì)克分子之比例為1～1.2。反應(yīng)時間在溫和的連續(xù)的攪拌下可達(dá)10min，從反應(yīng)管中轉(zhuǎn)移出反應(yīng)混合液，使其反應(yīng)停止。反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到含有200μl0.01mol/L、pH7.2PB和0.15mol/L NaCl溶液中，層析分離前再放置5min，使其未標(biāo)記的碘離子還原成分子碘，以避免在帶有緩沖液的柱中使白蛋白碘化。
3．注意事項
�。�1）涂有Iodogen的反應(yīng)管，有氮氣中密封，并貯存在-20℃條件下，至少可用3個月。打開管，使用時間很短。
�。�2）碘化反應(yīng)時間，7min時標(biāo)記率達(dá)最高，10min時略有減少。PH6.0～8.5時，標(biāo)記率最高。
（3）Iodogen與蛋白質(zhì)的比率是標(biāo)記率的函數(shù)。最大的標(biāo)記率是1克分子的Iodogen與8克分子或再多量之比。
2．方法
�。�1）標(biāo)記之前，先把Iodogen溶于有機(jī)溶劑，涂于管底，并使之干燥。
�。�2）標(biāo)記時，將蛋白質(zhì)溶液10～20μg/10μl(0.5mol/L,pH7.5PB)置于反應(yīng)管中，反應(yīng)管置于冰浴中。碘化時，125I與蛋白質(zhì)克分子之比例為1～1.2。反應(yīng)時間在溫和的連續(xù)的攪拌下可達(dá)10min，從反應(yīng)管中轉(zhuǎn)移出反應(yīng)混合液，使其反應(yīng)停止。反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到含有200μl0.01mol/L、pH7.2PB和0.15mol/L NaCl溶液中，層析分離前再放置5min，使其未標(biāo)記的碘離子還原成分子碘，以避免在帶有緩沖液的柱中使白蛋白碘化。
3．注意事項
�。�1）涂有Iodogen的反應(yīng)管，有氮氣中密封，并貯存在-20℃條件下，至少可用3個月。打開管，使用時間很短。
�。�2）碘化反應(yīng)時間，7min時標(biāo)記率達(dá)最高，10min時略有減少。PH6.0～8.5時，標(biāo)記率最高。
（3）Iodogen與蛋白質(zhì)的比率是標(biāo)記率的函數(shù)。最大的標(biāo)記率是1克分子的Iodogen與8克分子或再多量之比。
