1、脫蠟：
1）二甲苯脫蠟3次，每次5min；
2）100％酒精兩次，每次2min；
3）移出酒精，斜置切片，標(biāo)記末段向下，空氣干燥。
2、蛋白酶處理:
1）每個(gè)染色缸40ml蛋白酶K消化溶液，配制方法如下：2×SSC 40ml倒人Facal管，在水浴槽中預(yù)熱。將消化酶液加入管內(nèi)，搖動(dòng)直到酶溶解。
2） 37℃水浴槽中預(yù)熱染色缸和蛋白酶K溶液。37℃孵育20min。
3） ×SSC在室溫下漂洗切片3次，每次1min。
4）梯度酒精脫水（-20℃預(yù)冷）。
3、變性：
1）每一個(gè)立式染色缸配制40ml變性溶液；
2）78℃水浴槽中平衡預(yù)熱混合液染色缸；
3）78℃孵育8min；
4） 即移入-20℃預(yù)冷70%酒精的染色缸內(nèi)2min，再依次移入80%、90%和100%的-20℃預(yù)冷酒精內(nèi)，每缸2min；
5）空氣干燥。
4、雜交：
1）準(zhǔn)備探針；
2）取一個(gè)較大的濕盒，交叉放置切片；
3）滴10μl探針在切片的組織上，加蓋玻片；
4）蓋上濕盒蓋，37℃孵育12h～16h。
雜交后的水洗：
5）鑷子小心去除蓋玻片；
6）43℃預(yù)熱雜交后水洗溶液40ml水洗切片15min；
7）2×SSC(37℃)洗兩次，每次10min；
8）切片放人染色缸的1×PBS內(nèi)待檢測，勿使切片干燥。
檢測：
9）從1×PBS中取出切片，除去過多的水分，避免標(biāo)本干燥。把切片放入濕盒內(nèi)，同時(shí)處理4張切片。
10）每張切片使用30μl～60μl羅丹明抗-地高辛抗體或FITC卵白素，室溫下孵育20min；
11）去掉塑料蓋膜，把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室溫下洗3次，每次2min。
擴(kuò)增：
12）從1×PBS中取出切片，斜置切片使液體排出；
13）每張切片滴30μl～60μl抗-卵白素抗體，加塑料蓋膜，室溫孵育20min；
14）去掉塑料蓋膜，把切片放人含1×PBS的染色缸。1×PBS室溫下洗3次，每次2min；
15）從1×PBS中取出切片，斜置切片使液體排出；
16）每張切片滴30μl～60μl抗-卵白素抗體，加塑料蓋膜，室溫孵育20min；
17）1×PBS室溫下洗3次，每次2min。
5、細(xì)胞核染色：
1）張切片加10μl～20μl DAPI，覆蓋蓋玻片并在室溫下孵育2～5ml；
2）盡可能快的在熒光顯微鏡下觀察或封閉盒內(nèi)保存在-20℃冰箱。切片在染色之后1h內(nèi)可以在顯微鏡下觀察。
1）二甲苯脫蠟3次，每次5min；
2）100％酒精兩次，每次2min；
3）移出酒精，斜置切片，標(biāo)記末段向下，空氣干燥。
2、蛋白酶處理:
1）每個(gè)染色缸40ml蛋白酶K消化溶液，配制方法如下：2×SSC 40ml倒人Facal管，在水浴槽中預(yù)熱。將消化酶液加入管內(nèi)，搖動(dòng)直到酶溶解。
2） 37℃水浴槽中預(yù)熱染色缸和蛋白酶K溶液。37℃孵育20min。
3） ×SSC在室溫下漂洗切片3次，每次1min。
4）梯度酒精脫水（-20℃預(yù)冷）。
3、變性：
1）每一個(gè)立式染色缸配制40ml變性溶液；
2）78℃水浴槽中平衡預(yù)熱混合液染色缸；
3）78℃孵育8min；
4） 即移入-20℃預(yù)冷70%酒精的染色缸內(nèi)2min，再依次移入80%、90%和100%的-20℃預(yù)冷酒精內(nèi)，每缸2min；
5）空氣干燥。
4、雜交：
1）準(zhǔn)備探針；
2）取一個(gè)較大的濕盒，交叉放置切片；
3）滴10μl探針在切片的組織上，加蓋玻片；
4）蓋上濕盒蓋，37℃孵育12h～16h。
雜交后的水洗：
5）鑷子小心去除蓋玻片；
6）43℃預(yù)熱雜交后水洗溶液40ml水洗切片15min；
7）2×SSC(37℃)洗兩次，每次10min；
8）切片放人染色缸的1×PBS內(nèi)待檢測，勿使切片干燥。
檢測：
9）從1×PBS中取出切片，除去過多的水分，避免標(biāo)本干燥。把切片放入濕盒內(nèi)，同時(shí)處理4張切片。
10）每張切片使用30μl～60μl羅丹明抗-地高辛抗體或FITC卵白素，室溫下孵育20min；
11）去掉塑料蓋膜，把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室溫下洗3次，每次2min。
擴(kuò)增：
12）從1×PBS中取出切片，斜置切片使液體排出；
13）每張切片滴30μl～60μl抗-卵白素抗體，加塑料蓋膜，室溫孵育20min；
14）去掉塑料蓋膜，把切片放人含1×PBS的染色缸。1×PBS室溫下洗3次，每次2min；
15）從1×PBS中取出切片，斜置切片使液體排出；
16）每張切片滴30μl～60μl抗-卵白素抗體，加塑料蓋膜，室溫孵育20min；
17）1×PBS室溫下洗3次，每次2min。
5、細(xì)胞核染色：
1）張切片加10μl～20μl DAPI，覆蓋蓋玻片并在室溫下孵育2～5ml；
2）盡可能快的在熒光顯微鏡下觀察或封閉盒內(nèi)保存在-20℃冰箱。切片在染色之后1h內(nèi)可以在顯微鏡下觀察。
