將某一特定的靶基因傳遞到靶細(xì)胞，需要應(yīng)用某一基因運(yùn)載系統(tǒng)，目前將這一系統(tǒng)概括為兩大類：非病毒辣方法和病毒方法。
1.基因轉(zhuǎn)移的非病毒方法
直接注射法 將含有DNA的溶液直接注射到肌肉，以引起鄰近的細(xì)胞攝入DNA燕進(jìn)行表達(dá)，在肌細(xì)胞中，基因表達(dá)可持續(xù)數(shù)月。
磷酸鈣共沉淀法 將氯化鈣、DNA和磷酸鹽緩沖液混合，形成磷酸鈣微沉淀 ，附著于細(xì)胞膜并經(jīng)過細(xì)胞內(nèi)吞作用耐是入細(xì)胞質(zhì)。該方法的轉(zhuǎn)化效率通常很低。
脂質(zhì)體染法 指質(zhì)體能在體內(nèi)或體外提供運(yùn)載外源性遺傳物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的載體。脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移的最大優(yōu)勢(shì)在于能在活體內(nèi)應(yīng)用。
受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移 依靠受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞途徑以轉(zhuǎn)移外源基因。受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移方法是在質(zhì)粒DNA和某種特異的多肽（配體）之間形成復(fù)合體，而這種多肽能為細(xì)胞表面的肥體所識(shí)別。如若將DNA在體內(nèi)運(yùn)送至肝內(nèi)，可以選將DNA和能與肝細(xì)胞受體特異結(jié)合的去唾液酸糖蛋白質(zhì)偶聯(lián)，以便通過細(xì)胞內(nèi)吞過程而被攝入，這種DNA大部分被肝臟所攝取。應(yīng)用該方法轉(zhuǎn)移的外源基因在活體內(nèi)的表達(dá)持續(xù)時(shí)間較短，在評(píng)估實(shí)際應(yīng)用前影上還在一些問題。
顯微注射法 在顯微鏡下，將DNA經(jīng)同細(xì)胞玻璃針地接注入細(xì)胞，該法適合于各種培養(yǎng)生長(zhǎng)的細(xì)胞，但需要一定的設(shè)備和操作用支巧。
電穿孔法 利用脈沖場(chǎng)將DNA導(dǎo)入培養(yǎng)細(xì)胞。
微粒子轟擊法（基因槍）近幾年發(fā)展較快的轉(zhuǎn)移方法。使用高能微粒子轟擊將DNA導(dǎo)入培胞或活的哺乳動(dòng)物組織內(nèi)。亞微粒的鎢和金能自發(fā)地吸附DNA，將這些微彈加強(qiáng)速到很的速度轟擊細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用這種方法靶基因可在皮膚、肌肉、肝、胰、胃和乳腺等細(xì)胞中表達(dá)。
胚胎干細(xì)胞法 胚胎干細(xì)胞是從受精卵開始分裂至4個(gè)國(guó)胞階段未分化和具有多種潛能的生殖細(xì)胞，能在體外培養(yǎng)，可作為正面細(xì)胞，制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，以研究基因定向整合或基因剔險(xiǎn)及基因及能。
精子載體法 最近發(fā)現(xiàn)用精子和NDA-劑孵育，可捕獲得DNA。通過受精過程，將外源性基因?qū)胧芫�，可捕獲得物物，大大間化了轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的制備過程。
2.基因轉(zhuǎn)移的病毒的方法
病毒作為基因轉(zhuǎn)移的是基因遞送有有并工具，病毒載體的優(yōu)點(diǎn)有：（1）在轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中傳播重組的DNA分子作為穩(wěn)定的遺傳成分；（2）在可能將有有制陷的或突變的基因置于病毒調(diào)節(jié)信號(hào)的控制下以進(jìn)行研究；（3）能將克隆的基因作為病毒微染色體的一部分 ，并能進(jìn)分離；（4）轉(zhuǎn)移效率較高。其主要缺點(diǎn)是病毒載體對(duì)外源基因的最大容納量只有2500bp。目前常用的病毒載體有下列幾種。
逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 逆轉(zhuǎn)錄病毒辣為RNA病毒，它們的基因組編碼在一條單鏈RNA他婦上，病毒進(jìn)入細(xì)胞通過逆轉(zhuǎn)錄作用，病毒RNA即轉(zhuǎn)變?yōu)殡p鏈DNA分子，DNA進(jìn)入細(xì)胞核并整合在細(xì)胞染色體中，這種整合的病毒稱為原病毒。在原病毒的兩端各有一長(zhǎng)末端重復(fù)序列（LTR）,LTR內(nèi)側(cè)還有為復(fù)制所必需的其他順序，包括包裝信號(hào)。目前常用的逆轉(zhuǎn)病毒載體有CMV和SV。
DNA病毒載體 主要有腺病毒相關(guān)病毒載體，腺端正毒載體，皰疹病毒載體。對(duì)DNA病毒載體的研究是當(dāng)前基因基因治療研究中的重點(diǎn)領(lǐng)域。
常用的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)
將外源基因?qū)氚屑?xì)胞需要一定的載體和導(dǎo)入方法，基因轉(zhuǎn)技術(shù)則是將純化的含有靶基因的質(zhì)粒DNA送入細(xì)胞內(nèi)，并在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。轉(zhuǎn)染方法有多種，根據(jù)不同的細(xì)胞，貼壁或懸浮細(xì)所可選用不同的方法，其目的是要達(dá)到設(shè)置轉(zhuǎn)染效率，影響轉(zhuǎn)染產(chǎn)率的因素有多種，包括轉(zhuǎn)染方法、操作技術(shù)、質(zhì)粒DNA的純度、靶細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)等，下面重點(diǎn)介紹向幾種常用的轉(zhuǎn)染技術(shù)：
靶細(xì)胞的準(zhǔn)備 被用于作靶基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，其生長(zhǎng)狀態(tài)如何，將直接決定了基因轉(zhuǎn)染效率。如為貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，一般要求在轉(zhuǎn)染前一日，必需應(yīng)用胰酶處理成單細(xì)胞懸液，重新接種于培養(yǎng)皿或瓶，細(xì)胞密度以鋪滿培養(yǎng)器皿的60%為宜，轉(zhuǎn)染當(dāng)日，在轉(zhuǎn)染前4小時(shí)換一將近新鮮培養(yǎng)液。對(duì)于懸浮細(xì)胞，也需在轉(zhuǎn)染前4小時(shí)換一次新鮮培養(yǎng)液。
靶基因質(zhì)粒DNA的準(zhǔn)備 用于轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA必須無蛋白質(zhì)，無RNA和其了化學(xué)物質(zhì)的污染，OD260/280比值應(yīng)在1.8以上。應(yīng)用酚-氯仿抽提法制備的質(zhì)粒DNA一般難以達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)，目前大多采用進(jìn)口的術(shù)提取純化試劑盒。
具體的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)有鱗酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染法、DEAE葡聚糖介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法、脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法及電擊基因轉(zhuǎn)導(dǎo)塵等。靶基因被導(dǎo)入細(xì)胞后，一般在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)，靶基因即在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?8小時(shí)后即可進(jìn)行靶基因表達(dá)的檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)。如若建立穩(wěn)定的細(xì)胞系，則可對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行篩選，根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物，最常用的直核表達(dá)基因載體的標(biāo)志物有潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）。
