1. 取RNA
2. 將電泳槽和板，梳齒浸泡在3%H2O2中20-30分鐘，并吹干
3. 跑1%瓊脂糖凝膠，檢測樣本RNA含量
4. 變性膠
在桌面上利用保險膜鋪出一塊干凈的區(qū)域，將1.95g 瓊脂糖加入110ml 的 DEPC-H2O （加熱前可在三角瓶上做一個記號，在加熱后把蒸發(fā)的水分補足）加熱沸騰，冷卻（補水）至60度左右。加入15ml 10xMOPS (PH8.0)和25ml 甲醛，混勻后倒膠，冷卻待用。
5． 電泳液（1L）
100ml 10xMOPS (PH7.0)
800ml DEPC-H2O
100ml 甲醛
6． sample buffer(-70度保存)
1650 μl 體系：
200μl 10xMOPS (PH8.0)
350μl 甲醛
1ml 甲酰胺
100μl loading buffer(DNA用染料)
用槍吹吸混勻
以樣品RNA : sample buffer= 1:3 (v:v) 的比例加入 （RNA marker 同樣）
點樣前 68℃ 5分鐘（RNA marker 同樣）
7．跑電泳
120-150V，大約4-6小時（跑到整塊膠還剩下1/3）每半個小時吸一次陽極的電泳液到陰極（平衡酸堿性），將膠切下。如加RNA marker 則用EB染5’，洗20’，將膠切去一個角作為位置記號。
8. 轉膜
轉膜液： 20xSSC:
1000ml體系：
175.3g NaCl
88.2g 檸檬酸納
NaOH 調節(jié)到PH7.0
定容
搭建鹽橋：將20XSSC倒入白磁盤中，上擔一塊玻璃板，用一張大濾紙，兩邊浸入白盤中SSC，注意：防止短路，接觸面不能有氣泡，上反放膠，覆與膠等大的尼龍膜，再覆等大的濾紙，再壓上一疊吸水紙，壓上重物。
9． 壓膜16h以上，期間要換吸水紙。紫外交聯(lián)2’。7XSSC洗15’。用濾紙包膜，以培養(yǎng)皿壓住。
10． 烘膜
80℃ 2h
舊膜以煮沸的洗膜液洗脫兩次，10’每次輕柔震蕩。
11.預雜交
先用水沖洗雜交管，再用洗膜液沖洗。
加5ML 預雜交液（雜交液沒過膜即可）于雜交管中，將膜小心放入用雜交液將膜浸潤，使其貼在管壁上，不可有氣泡，有DNA的一面朝向管內(nèi)，放入雜交爐中55度轉3hr以上，（舊膜半小時）
12. 探針標記
1． 做柱子
用燒紅的針頭將0.5ml的離心管底部戳一個小洞，加入玻璃纖維將開口堵住，入Sephadex G50 3000rpm 5’，待液體流盡后，加入TE洗滌三次（3000rpm 5’）。
2． 標探針
在離心管中加入探針約2ul（20-70ng, 太多會競爭性吸收同位素），
oligo(kit1) 2μl
buffer(kit2) 2.5μl，
雙蒸水12.5μl，
100℃ 5’，0℃ 5’
再加入dNTP(kit4) 2.5μl.
Klenow 1μl
雙蒸水6ul
-p32-dCTP 1.5μl,
37℃水浴 20-30’
加入TE 100μl，過柱純化，套上大1.5ML 安培管，3000 rpm 3-5min , 再加入100μl TE 洗柱子3000 rpm 3min, 加入4μl 6N NaOH 室溫變性5min(可先將NaOH加入管中)
5．雜交
將探針加入雜交管中（注意不要加在膜上）65℃雜交過夜（大于16小時），膜不能干掉。
6．洗膜
室溫下用少量洗膜液洗滌雜交膜3-5min，注意回收放射性洗液，倒入洗膜液，65℃ 10min 回收洗液，用放射性計數(shù)器測一下放射強度，視放射強度，然后重復1-2次。
7．壓磷屏
用保鮮膜將膜包好（液體要吸干），壓磷屏20hr左右，掃描觀察。
