等電點(diǎn)聚焦就是在電泳槽中放入載體兩性電解質(zhì)，當(dāng)通以直流電時(shí)，兩性電解質(zhì)即形成一個(gè)由陽極到陰極逐步增加的pH梯度，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)放進(jìn)此體系時(shí)，不同的蛋白質(zhì)即移動(dòng)到或聚焦于與其等電點(diǎn)相當(dāng)?shù)膒H位置上，電聚焦的優(yōu)點(diǎn)是：有很高的分辨率，可將等電點(diǎn)相差0.01-0.02pH單位的蛋白質(zhì)分開；一般電泳由于受擴(kuò)散作用的影響，隨著時(shí)間和所走的距離加長(zhǎng)，區(qū)帶越走越寬，而電聚焦能抵消擴(kuò)散作用，使區(qū)帶越走越窄；由于這種電聚焦作用，不管樣品加在什么部位，都可聚焦到其電點(diǎn)，很稀的樣品也可進(jìn)行分離；可直接測(cè)出蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，其精確度可達(dá)0.01pH單位。電聚焦技術(shù)的缺點(diǎn)是：一是電聚焦要求用無鹽溶液，而在無鹽溶液中蛋白質(zhì)可能發(fā)生沉淀，二 是樣品中的成分必需停留于其等電點(diǎn)，不適用在等電點(diǎn)不溶或發(fā)生變性的蛋白質(zhì)。 電聚焦技術(shù)要求有穩(wěn)定的pH梯度，要求極防止對(duì)流和防止已分離區(qū)帶再混合的措施，其辦法有三：密度梯度，聚丙烯酰胺凝膠和區(qū)帶對(duì)流聚焦，以第一種方法為常用。