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一、概要
己烯雌酚(diethylstibestrol,DES)是一種人工合成的雌激素,在促進動物蛋白質(zhì)的合成代謝、提高動物日增重和減少脂肪等方面效果明顯,因此一直被作為一種動物生長促進劑用于畜禽以及水產(chǎn)品養(yǎng)殖中。國際癌癥研究機構(gòu)(IARC)研究發(fā)現(xiàn),DES是一種致癌物質(zhì),能夠在動物源性食品如肝 臟、肌肉、蛋、奶中殘留,并通過食物鏈危害人體健康。因此世界各國規(guī)定食品動物養(yǎng)殖中不得以任何途徑和方式使用DES養(yǎng)殖動物及動物性食品中不得檢出 DES。
己烯雌酚檢測試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測產(chǎn)品，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。
二、試驗原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被己烯雌酚抗原，樣品殘留的己烯雌酚和微孔條上預包被的抗原共同競爭抗己烯雌酚抗體，加入酶標二抗后，經(jīng)TMB底物顯色，樣品吸光度值與其殘留物己烯雌酚呈負相關(guān)，與標準曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中己烯雌酚的含量。
三、適用范圍
可定性、定量檢測動物組織、飼料、尿液等樣品中己烯雌酚的殘留量。
四、交叉反應(yīng)率
己烯雌酚 ……………………………………… 100%
五、檢測步驟
測定前應(yīng)須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號：將樣品和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣品和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣品孔所在的位置。
5 加標準品/樣品：加標準品/樣品100l/孔到對應(yīng)的微孔中，然后加入己烯雌酚抗試劑50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液250l/孔，充分洗滌4～5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、加酶標物：加入己烯雌酚酶標物100l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min，取出重復洗板步驟6。
8、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15～20min。
9、測定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。(若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定)。
六、檢測方法靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.1ppb
樣品最低檢測限：
動物組織…………………………………1.5ppb
飼料、豆粕…………………………………10ppb
牛奶…………………………………3ppb
奶粉 …………………………………4ppb
回收率：
組織樣品………………………………………100±10%
飼料、豆粕…………………………………90±10%
牛奶………………………………………90±10%
奶粉………………………………………90±10%
精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%
七、注意事項
1、室溫低于20℃或試劑及樣品沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質(zhì)的跡象
發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時間到30min。反之，則減短反應(yīng)時間。
八、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個月。
己烯雌酚(diethylstibestrol,DES)是一種人工合成的雌激素,在促進動物蛋白質(zhì)的合成代謝、提高動物日增重和減少脂肪等方面效果明顯,因此一直被作為一種動物生長促進劑用于畜禽以及水產(chǎn)品養(yǎng)殖中。國際癌癥研究機構(gòu)(IARC)研究發(fā)現(xiàn),DES是一種致癌物質(zhì),能夠在動物源性食品如肝 臟、肌肉、蛋、奶中殘留,并通過食物鏈危害人體健康。因此世界各國規(guī)定食品動物養(yǎng)殖中不得以任何途徑和方式使用DES養(yǎng)殖動物及動物性食品中不得檢出 DES。
己烯雌酚檢測試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測產(chǎn)品，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。
二、試驗原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被己烯雌酚抗原，樣品殘留的己烯雌酚和微孔條上預包被的抗原共同競爭抗己烯雌酚抗體，加入酶標二抗后，經(jīng)TMB底物顯色，樣品吸光度值與其殘留物己烯雌酚呈負相關(guān)，與標準曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中己烯雌酚的含量。
三、適用范圍
可定性、定量檢測動物組織、飼料、尿液等樣品中己烯雌酚的殘留量。
四、交叉反應(yīng)率
己烯雌酚 ……………………………………… 100%
五、檢測步驟
測定前應(yīng)須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號：將樣品和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣品和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣品孔所在的位置。
5 加標準品/樣品：加標準品/樣品100l/孔到對應(yīng)的微孔中，然后加入己烯雌酚抗試劑50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液250l/孔，充分洗滌4～5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、加酶標物：加入己烯雌酚酶標物100l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min，取出重復洗板步驟6。
8、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15～20min。
9、測定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。(若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定)。
六、檢測方法靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.1ppb
樣品最低檢測限：
動物組織…………………………………1.5ppb
飼料、豆粕…………………………………10ppb
牛奶…………………………………3ppb
奶粉 …………………………………4ppb
回收率：
組織樣品………………………………………100±10%
飼料、豆粕…………………………………90±10%
牛奶………………………………………90±10%
奶粉………………………………………90±10%
精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%
七、注意事項
1、室溫低于20℃或試劑及樣品沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質(zhì)的跡象
發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時間到30min。反之，則減短反應(yīng)時間。
八、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個月。
