一、概要
萊克多巴胺(Ractopamine,RAC)是一種苯乙醇胺類β2-腎上腺素受體激動劑，具有廣泛的生理效應(yīng)，臨床上主要用于治療支氣管哮喘，沖血性心力衰竭癥和肌肉萎縮癥等。當(dāng)其用量高于臨床用量的5～10倍時(shí)，能調(diào)節(jié)體內(nèi)代謝，增加脂肪分解，促進(jìn)蛋白合成，表現(xiàn)出營養(yǎng)再分配效應(yīng)。添加于飼料中，極大的提高了家畜的瘦肉率。當(dāng)人食用含有萊克多巴胺的動物組織后，極易產(chǎn)生心跳加快、震顫、心悸等中毒反應(yīng)，更嚴(yán)重的會導(dǎo)致人體致畸致癌。 萊克多巴胺檢測試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測產(chǎn)品，能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。

二、試驗(yàn)原理
萊克多巴胺檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被萊克多巴胺抗原，樣本殘留的萊克多巴胺和微孔條上預(yù)包被的抗原共同競爭抗萊克多巴胺抗體，加入酶標(biāo)二抗后，加入TMB底物顯色，樣本吸光度值與其殘留物萊克多巴胺呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中萊克多巴胺的含量。

三、適用范圍:
萊克多巴胺檢測試劑盒可定性、定量檢測動物組織、飼料、尿液等樣本中萊克多巴胺的殘留量。

四、交叉反應(yīng)率
萊克多巴胺 ………………………………………  100%
多巴酚丁胺 …………………………………………小于1%
鹽酸多巴胺?…………………………………………小于1%
克侖特羅 ………………………………………小于1%
沙丁胺醇 …………………………………………小于1%

五、提供的材料與試劑
酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品×5瓶*、萊克多巴胺高濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ppb、萊克多巴胺抗試劑、萊克多巴胺酶標(biāo)物、底物液A液、底物液B液、終止液、濃縮洗滌液(10×) 萊克多巴胺濃縮樣品稀釋液(2×)

六、操作步驟： 
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5  加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50l/孔到對應(yīng)的微孔中，然后加入萊克多巴胺抗試劑50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液250l/孔，充分洗滌4~5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、加酶標(biāo)物：加入萊克多巴胺酶標(biāo)物100l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min，取出重復(fù)洗板步驟6。
8、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15～20min。
9、測定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。(若無酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測法可進(jìn)行判定)。

七、方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.1ppb
樣本最低檢測限：
動物組織…………………………………0.1ppb
飼料樣本……………………………………5ppb
尿液樣本……………………………………0.1ppb
回收率：
動物組織………………………………………80±10%
飼料樣本………………………………………80±10%
尿液樣本………………………………………80±10%
精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%

八、注意事項(xiàng)
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒；不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件
保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質(zhì)的跡象
發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時(shí)間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時(shí)間到30min。反之，則減短反應(yīng)時(shí)間。
9、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。