泵 ：四元泵、二元泵

在線脫氣器 

進(jìn)樣器：自動(dòng)進(jìn)樣器及手動(dòng)進(jìn)樣器

柱溫箱

檢測(cè)器： DAD檢測(cè)器、UV檢測(cè)器

如果在低UV波長(zhǎng)段，用最高靈敏度進(jìn)行檢測(cè)

如果要求使用最佳進(jìn)樣精度

如果要求保留時(shí)間重現(xiàn)性很高（在0.5ml/min流速以下）

如果樣品和檢測(cè)對(duì)流動(dòng)相中溶解氧敏感

打開(kāi)計(jì)算機(jī),進(jìn)入Windows NT 或Windows 2000 畫面,并運(yùn)行Bootp Server程序（點(diǎn)擊左下方【Bootp Server】圖標(biāo)）

打開(kāi)色譜儀各組件電源，待Bootp Server里顯示已聯(lián)上各組件的信息及各模塊自檢完成后，雙擊Instrument 1 Online ，圖標(biāo)打開(kāi)工作站。化學(xué)工作站自動(dòng)與1100通訊。

將流動(dòng)相放入溶劑瓶中，打開(kāi)Purge 閥，依次單擊【Pump】→【Set up Pump】，設(shè)Flow為2ml/min，單擊OK ，再依次單擊【Pump】→【control】，選中on，單擊OK，則系統(tǒng)開(kāi)始Purge至管路無(wú)氣泡為止，切換管路反復(fù)操作至所需管路均無(wú)氣泡。

在【control】選項(xiàng)中選off，關(guān)閉泵，關(guān)閉Purge 閥。單擊泵下面瓶圖標(biāo)，輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。

打開(kāi)10％異丙醇溶液控制閥，用針筒抽吸至管路中有液體流出。調(diào)節(jié)控制閥松緊，控制流量至流出量約為每分鐘5～15滴。

新方法建立：點(diǎn)擊【Method】，點(diǎn)擊【Edit entire method】或【New method】選項(xiàng)，進(jìn)行方法編緝。

在Method Comments 中加入方法的信息如色譜條件、方法的用途等點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫面

泵參數(shù)設(shè)定：設(shè)定流速、比例、梯度、運(yùn)行時(shí)間、平衡時(shí)間等。點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫面

自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定：設(shè)定進(jìn)樣量、洗瓶位置、進(jìn)樣方式等

進(jìn)樣方式：“Standard Injection”只能輸入進(jìn)樣體積“Injection with Needle Wash”可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置此方式針從樣品瓶抽完樣品后會(huì)在洗瓶中洗針

Use injector program：可以點(diǎn)擊Edit 鍵進(jìn)行進(jìn)樣程序編輯

柱溫箱參數(shù)設(shè)定：在”Temperature”下面的方框內(nèi)輸入所需溫度,并選中它,點(diǎn)擊”more>>”鍵,選中“Same as left”使柱溫箱的溫度左右一致。點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫面

檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定－UV：在”Wavelength”下方的空白處輸入所需的檢測(cè)波長(zhǎng),如254nm, 在“Peakwidth (Response time)”下方點(diǎn)擊下拉式三角框,選擇合適的響應(yīng)時(shí)間, 如>0.1min(2s)，在Timetable 中可以Insert 一行輸入隨時(shí)間切換的波長(zhǎng)。點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫面

檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定－DAD

樣品波長(zhǎng)--一般選擇最大吸收處的波長(zhǎng)

樣品帶寬BW-一般選擇最大吸收值一半處的整個(gè)寬度

參比波長(zhǎng)-一般選擇在靠近樣品信號(hào)的無(wú)吸收或低吸收區(qū)域

參比帶寬BW-至少要與樣品信號(hào)的帶寬相等許多情況下用100nm作為缺省值

Peak width Response time 其值盡可能接近要測(cè)的窄峰峰寬

選中所用的燈點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫面

方法保存

單擊Method 菜單選中Save method as 輸入一方法名，如test 

單擊Ok

選擇已有方法：點(diǎn)擊【Method】，點(diǎn)擊【Load method】選項(xiàng)，選取已存的各種操作方法。 

將樣品放于樣品盤中相應(yīng)位置，所有的樣品均需澄清。

待儀器顯示Ready，基線平穩(wěn)，從【Run control】菜單中選擇【Run Method】，開(kāi)始進(jìn)樣分析�；螯c(diǎn)擊【Start】開(kāi)始進(jìn)樣分析。

數(shù)據(jù)處理：?jiǎn)螕簟綱iew】菜單，單擊【Data analysis】選項(xiàng)，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。單擊【View】菜單，單擊【Method and Run control】選項(xiàng)，回到樣品分析界面。

數(shù)據(jù)分析方法編輯

從File 菜單選擇Load signal 選中您的數(shù)據(jù)文件名

單擊Ok

積分

從Integration 中選擇“Auto integrate”,如積分結(jié)果不理想,再?gòu)牟藛沃羞x擇Integration Events 選項(xiàng)選擇合適的Slope sensitivity 、Peak width 、Area reject、 Height reject。

從Integration 菜單中選擇Integrate 選項(xiàng)則數(shù)據(jù)被積分

如積分結(jié)果不理想則修改相應(yīng)的積分參數(shù)直到滿意為止

單擊左邊圖標(biāo)將積分參數(shù)存入方法

沖洗系統(tǒng)：反相柱用10％的甲醇水沖洗系統(tǒng)30分鐘，再用100％甲醇沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后關(guān)泵，正相柱先用合適溶劑沖洗，后用柱保存液沖洗。

退出工作站，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。

關(guān)閉10％異丙醇溶液控制閥。

關(guān)閉儀器各組件

關(guān)掉Agilent 1100電源開(kāi)關(guān)

1、色譜柱使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的說(shuō)明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動(dòng)相類型等；必須使用保護(hù)柱；色譜柱長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑，兩端封死保存。

2、流動(dòng)相使用前必須過(guò)濾，不要使用多日存放的蒸餾水（易長(zhǎng)菌）。

3、儀器運(yùn)行時(shí)，泵頭必須用10%異丙醇水溶液虹吸沖洗，不能干涸。

4、注意各流動(dòng)相所剩溶液的容積設(shè)定，若設(shè)定的容積低于最低限會(huì)自動(dòng)停泵。

5、對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣器當(dāng)使用緩沖溶液時(shí)要用水沖洗進(jìn)樣口同時(shí)搬動(dòng)進(jìn)樣閥數(shù)次每次數(shù)毫升

6、若使用含鹽流動(dòng)相，開(kāi)機(jī)時(shí)必須先用10%甲醇水溶液沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動(dòng)相。

7、溶劑瓶中的沙芯過(guò)濾頭容易破碎，在更換流動(dòng)相時(shí)注意保護(hù)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)過(guò)濾頭變臟或長(zhǎng)菌時(shí)，不可用超聲洗滌，可用35%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌。

8、檢測(cè)器的燈有使用壽命限制，一般在正式進(jìn)樣分析前30min 左右開(kāi)啟D燈或W燈，分析結(jié)束，立即關(guān)燈。

9、使用雙泵時(shí)，A、B、C、D四相中，若所用流動(dòng)相中有含鹽流動(dòng)相，則A、D（進(jìn)液口位于混合器下方）放置含鹽流動(dòng)相，B、C（進(jìn)液口位于混合器上方）放置不含鹽流動(dòng)相。

對(duì)色譜柱、儀器起到保護(hù)作用

由于填料顆粒很細(xì)色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)使色譜柱堵塞

儀器溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)增加進(jìn)樣閥的堵塞和磨損同時(shí)也會(huì)增加泵頭內(nèi)的藍(lán)寶石活塞桿和活塞的磨損

消除由于污染對(duì)分析結(jié)果的影響

30mm內(nèi)徑適用于大進(jìn)樣量的過(guò)濾由0.2?m和0.45?m兩種規(guī)格,材料有纖維素,醋酸纖維,聚四氟乙烯處理樣品體積少于50?l

13mm內(nèi)徑適用于一般進(jìn)樣量的過(guò)濾由0.2?m和0.45?m兩種規(guī)格,材料為纖維素

3mm內(nèi)徑適用于小進(jìn)樣量的過(guò)濾由0.2?m和0.45?m兩種規(guī)格處理樣品體積為7?l

聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑、酸和鹽。無(wú)任何可溶物脫落。

醋酸纖維濾膜：不適用于有機(jī)溶劑，特別適用于水基溶液�？捎糜诘鞍踪|(zhì)和其相關(guān)樣品

尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液可用于強(qiáng)酸、70%乙醇、二氯甲烷。不適用于二甲基甲酰胺。

再生纖維素濾膜：具有蛋白吸收低同樣適用水溶性樣品和有機(jī)溶劑

防止因產(chǎn)生氣泡增加基線的噪音，造成靈敏度下降甚至無(wú)法分析

溶解的氧氣可能會(huì)導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化

柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能

若用FID 可能會(huì)造成熒光猝滅

常用的脫氣方法比較

氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低連續(xù)吹氦脫氣效果較好但成本高

加熱回流法：效果較好但操作復(fù)雜且有毒性揮發(fā)污染

抽真空脫氣法：易抽走有機(jī)相

超聲脫氣法：流動(dòng)相放在超聲波容器中用超聲波振蕩10～15min 此法效果最差。

在線真空脫氣法：真空脫氣機(jī)利用膜滲透技術(shù)

在線脫氣智能控制無(wú)需額外操作成本低脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法并適用于多元溶劑體系

請(qǐng)嚴(yán)格執(zhí)行溶劑過(guò)濾

請(qǐng)勿使用多日存放的蒸餾水及磷酸鹽緩沖液

如果應(yīng)用許可可在溶劑中加入0.0001---0.001M的疊氮化鈉.

在溶劑瓶?jī)?nèi)溶劑的上方小流量連續(xù)吹氬氣,以隔絕空氣

避免使溶劑瓶暴露在直射陽(yáng)光下盡量使用琥珀色的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液

堵塞后的處理法方法：

將過(guò)濾頭從組件中取下在35%硝酸液中浸泡1h，然后用二次蒸餾水沖洗干凈。

1、流動(dòng)相使用前必須脫氣過(guò)濾

2、使用緩沖鹽時(shí)要加在線Seal-wash選項(xiàng)

3、關(guān)機(jī)前反相色譜柱用10%的甲醇水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘，然后關(guān)泵。正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇�沖洗。

4、及時(shí)更換Purge Valve內(nèi)的過(guò)濾芯，當(dāng)打開(kāi)Purge Valve時(shí)壓力高于10bar 表明過(guò)濾芯已堵

5、使用合適的密封圈：標(biāo)準(zhǔn)密封圈能適合于大多數(shù)應(yīng)用。但使用正相溶劑最好使用聚四氟乙烯密封圈，泵的壓力限制最大壓力設(shè)為200bar。

6、使用梯度比例時(shí)的注意事項(xiàng)：

當(dāng)鹽溶液與有機(jī)溶劑溶液混合時(shí)鹽溶液能與有機(jī)溶劑溶液完全混溶而不會(huì)出現(xiàn)沉淀。

由于在比例閥的混合點(diǎn)重力作用使鹽顆粒沉淀下來(lái)通常閥A接水相/鹽溶液D接有機(jī)溶劑此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中并被溶解若顛倒過(guò)來(lái)鹽可能落在有機(jī)溶劑中出現(xiàn)問(wèn)題

當(dāng)使用緩沖鹽溶液和有機(jī)溶劑時(shí)推薦將緩沖鹽通道接在A通道上有機(jī)溶劑通道直接接在A通道的上方D通道上定期用水沖洗所有的通道以除去閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀

進(jìn)樣量的多少要根據(jù)定量管的LOOP體積決定

當(dāng)樣品量少時(shí)進(jìn)樣體積由注射器的進(jìn)樣體積決定但最大進(jìn)樣體積要小于1/2loop體積

當(dāng)樣品量較多時(shí)進(jìn)樣體積由定量管的體積決定為保證樣品完全把定量管的流動(dòng)相置換干凈需注射5-6倍的LOOP體積

要使用專用的液相注射器進(jìn)樣絕對(duì)不可以用氣相的注射器

使用自動(dòng)洗針功能

自動(dòng)洗針功能可以把程序設(shè)置為“帶有洗針的進(jìn)樣”,或?qū)⒆詣?dòng)洗針功能包 含在進(jìn)樣器程序中。當(dāng)使用自動(dòng)洗針功能時(shí)，進(jìn)樣針在取樣后會(huì)轉(zhuǎn)移到洗針 步驟。造成攜留效應(yīng)的主要原因是殘留在進(jìn)樣針外的少量樣品。通過(guò)進(jìn)樣后 的洗針功能可以立即洗去針外表面上殘留的樣品。當(dāng)進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)回到主流路 時(shí)，定量管和針內(nèi)所有的樣品都被沖洗到色譜柱中。這種結(jié)合洗針和沖洗管 路的設(shè)計(jì)可以把攜留效應(yīng)減低到最小的程度。

去掉洗滌瓶蓋：為了獲得最佳的分析結(jié)果，裝有溶劑的洗滌瓶是不加蓋的，而且洗滌瓶中的 溶劑對(duì)樣品組分有較好的溶解作用。如果洗滌瓶有蓋將會(huì)有少量樣品留在密 封墊上，這樣會(huì)把殘留的樣品帶到下一個(gè)樣品中。