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HPLC常見問題和解決方法總匯

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-04-11  來源:儀器設(shè)備行業(yè)網(wǎng)
核心提示:壓力異常操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀察到的現(xiàn)象,并在右側(cè)的列表中參考相應(yīng)的解決方法。A、 沒有壓力顯示
    

操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀察到的現(xiàn)象,并在右側(cè)的列表中參考相應(yīng)的解決方法。

A、        沒有壓力顯示,沒有流動相流動

 

解決方法

1、電源問題

1、接通電源,開機(jī)

2、保險(xiǎn)絲被燒壞

2、更換保險(xiǎn)絲

3、控制器設(shè)定不正確或設(shè)定失敗

3、a、采取恰當(dāng)?shù)脑O(shè)定

b、修理或更換控制器

4、柱塞桿折斷

4、更換柱塞桿

5、泵頭內(nèi)有空氣

5、溶劑脫氣、啟動泵抽出空氣

6、流動相不足

6a、補(bǔ)充流動相

b、更換入口濾頭

7、單向閥損壞

7、更換單向閥

8、漏液

8、擰緊或更換手緊接頭

B         流動相流動正常,但沒有壓力顯示

 

解決方法

1、儀表損壞

1、更換儀表

2、壓力傳感器損壞

2、更換壓力傳感器

C        壓力持續(xù)偏高

 

解決方法

1、流速設(shè)定過高

1、調(diào)整流速設(shè)定

2、柱前篩板堵塞

2a、在允許情況下反沖色譜柱

b、更換篩板

c、更換色譜柱

3、流動相使用不當(dāng)或緩沖鹽的結(jié)晶沉淀

3a、使用恰當(dāng)?shù)牧鲃酉?o:p>

b、沖洗色譜柱

4、色譜柱選擇不當(dāng)

4、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱

5、進(jìn)樣閥損壞

5、清洗或更換進(jìn)樣閥

6、柱溫過低

6、提高溫度

7、控制器失常

7、修理或更換控制器

8、保護(hù)柱阻塞

8、清洗或更換保護(hù)柱

9、在線過濾器阻塞

9、清洗或更換在線過濾器

D、        壓力持續(xù)偏低

 

解決方法

1、流速設(shè)定過低

1、調(diào)整流速

2、系統(tǒng)漏液

2、確定漏液位置并維修

3、色譜柱選擇不當(dāng)

3、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱

4、柱溫過高

4、降低溫度

5、控制器失常

5、維修或更換控制器

E、         壓力不斷上升

 

解決方法

1、見列表C

1、見列表C

F、         壓力降為零

 

解決方法

1、見列表AB

1、見列表A、B

G、        壓力不斷下降,但不回零

 

解決方法

1、見列表D

1、見列表D

H、        壓力波動

 

解決方法

1、泵中有氣體

1、a、溶劑脫氣

b、從泵中除去氣體

2、單向閥損壞

2、更換單向閥

3、泵密封損壞

3、更換泵密封

4、脫氣不充分

4a、溶劑脫氣

b、改變脫氣方法(使用在線脫氣法等)

5、系統(tǒng)漏液

5、確定漏液位置并維修

6、使用梯度洗脫

6、由于流動相粘度的變化引起的壓力波動

 

  

通?梢酝ㄟ^擰緊或更換管路接頭來解決漏液的問題。但值得注意的是過份擰緊會導(dǎo)致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過稍微擰緊接頭不能解決漏液的問題,就必須將接頭取下,檢查是否損壞(例如,卡套損壞、密封表面有雜質(zhì));損壞的接頭應(yīng)該更換掉。

A、        接頭處漏液

 

解決方法

1、接頭松動

1、擰緊

2、接頭磨損

2、更換

3、接頭過緊

3a、擰松,再重新擰緊

b、更換

4、接頭被污染

4、a、拆下清洗

b、更換

5、部件不匹配

5、使用同一品牌的配件

B、         泵漏液

 

解決方法

1、單向閥松動

1、a、擰緊單向閥(不必?cái)Q的過緊)

b、更換單向閥

2、接頭松動

2、擰緊接頭(不必?cái)Q的過緊)

3、混合器密封損壞

3a、更換混合器密封

b、更換混合器

4、泵密封損壞

4、維修或更換泵密封件

5、壓力傳感器損壞

5、維修或更換壓力傳感器

6、脈沖阻尼器損壞

6、更換脈沖阻尼器

7、比例閥損壞

7、a、檢查隔膜,如果漏液立即更換

b、檢查手緊接頭,損壞的立即更換

8、放空閥的損壞

8a、擰緊放空閥

b、更換放空閥

C、        進(jìn)樣閥漏液

 

解決方法

1、轉(zhuǎn)子密封損壞

1、重新安裝或更換進(jìn)樣閥

2、定量環(huán)阻塞

2、更換定量環(huán)

3、進(jìn)樣口密封松動

3、調(diào)整

4、進(jìn)樣針頭尺寸不合適

4、使用恰當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣針

5、廢液管中產(chǎn)生虹吸

5、保持廢液管高于廢液液面

6、廢液管阻塞

6、更換或疏通廢液管

D、        色譜柱漏液

 

解決方法

1、尾端接頭松動

1、擰緊接頭

2、卡套內(nèi)有填料

2、拆下、清洗卡套、重新安裝

3、篩板厚度不合適

3、使用合適的篩板(參考下表)

篩板選擇指導(dǎo)

物質(zhì)粒徑

篩板孔徑

3-4u

0.5u

5-20u

2u

E、         檢測器漏液

 

解決方法

1、流通池墊片損壞

1、a、避免過大的背景壓力(壓力降)

b、更換墊片

2、流通池窗破碎

2、更換窗口

3、手緊接頭漏液

3、擰緊或更換

4、廢液管阻塞

4、更換廢液管

5、流通池阻塞

5、重新安裝或更換

液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變設(shè)備參數(shù)得到解決;而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。

A、        峰拖尾

 

解決方法

1、篩板阻塞

1、a、反沖色譜柱

b、更換進(jìn)口篩板

c、更換色譜柱

2、色譜柱塌陷

2、填充色譜柱

3、干擾峰

3、a、使用更長的色譜柱

b、改變流動相或更換色譜柱

4、流動相PH選擇錯誤

4、調(diào)整PH值。對于堿性化合物,低PH值更有利于得到對稱峰

5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應(yīng)圖

5、a、加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑

b、更改色譜柱

B、         峰前延

 

解決方法

1、柱溫低

1、升高柱溫

2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)

2、使用流動相作為樣品溶劑

3、樣品過載

3、降低樣品含量

4、色譜柱損壞

4、見A1、A2

C        峰分叉

 

解決方法

1、          保護(hù)柱或分析柱污染

1、取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞,拆下來清洗。如果問題仍然存在,可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染,運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧。如果問題仍然存在,入口可能被阻塞,更換篩板或更換色譜柱。

2、樣品溶劑不溶于流動相

2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動相作為樣品溶劑。

D、        峰變形

 

解決方法

1、樣品過載

1、減少樣品載量

E、         早出的峰變形

 

解決方法

1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)

1、a、減少進(jìn)樣體積

b、運(yùn)用低極性樣品溶劑

F、         早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

 

解決方法

1、柱外效應(yīng)

1、a、調(diào)整系統(tǒng)連接(使用更短、內(nèi)徑更小的管路)

b、使用小體積的流通池

G、        K’增加時,脫尾更嚴(yán)重

 

解決方法

1、二級保留效應(yīng),反相模式

1、a、加入三乙胺(或堿性樣品)

b、加入乙酸(或酸性樣品)

c、加入鹽或緩沖劑(或離子化樣品)

d、更換一支柱子

2、二級保留效應(yīng),正相模式

2、a、加入三乙胺(或堿性樣品)

b、加入乙酸(或酸性樣品)

c、加入水(或多官能團(tuán)化合物)

d、試用另一種方法

3、二級保留效應(yīng),離子對

3、加入三乙胺(或堿性樣品)

H、        酸性或堿性化合物的峰拖尾

 

解決方法

1、緩沖不合適

1、a、使用濃度50-100mM的緩沖液

b、使用Pka等于流動相PH值的緩沖液

I、            額外的峰

 

解決方法

1、樣品中有其他組份

1、正常

2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰

2a、增加運(yùn)行時間或梯度斜率

b、提高流速

3、空位或鬼峰

3a、檢查流動相是否純凈

b、使用流動相作為樣品溶劑

c、減少進(jìn)樣體積

J、           保留時間波動

 

解決方法

1、溫控不當(dāng)

1、調(diào)好柱溫

2、流動相組分變化

2、防止變化(蒸發(fā)、反應(yīng)等)

3、色譜柱沒有平衡

3、在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時間平衡色譜柱

K        保留時間不斷變化

 

解決方法

1、流速變化

1、重新設(shè)定流速

2、泵中有氣泡

2、從泵中除去氣泡

3、流動相選擇不恰當(dāng)

3a、更換合適的流動相

b、選擇合適的混合流動相

L、         基線漂移

 

解決方法

1、柱溫波動。(即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。)

1、控制好柱子和流動相的溫度,在檢測器之前使用熱交換器

2、流動相不均勻。(流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。)

2、使用HPLC級的溶劑,高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進(jìn)行脫氣,使用中使用氦氣。

3、流通池被污染或有氣體

3、用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用鹽酸)

4、檢測器出口阻塞。(高壓造成流通池窗口破裂,產(chǎn)生噪音基線)

4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。

5、流動相配比不當(dāng)或流速變化

5、更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。

6、柱平衡慢,特別是流動相發(fā)生變化時

6、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗,更改流動相時,在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進(jìn)行沖洗。

7、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成

7、檢查流動相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑

8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。

8、使用保護(hù)柱,如有必要,在進(jìn)樣之間或在分析過程中,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。

9、使用循環(huán)溶劑,但檢測器未調(diào)整。

9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測器動力學(xué)范圍發(fā)生變化時,使用新的流動相。

10、檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處。

10、將波長調(diào)整至最大吸收波長處

M、       基線噪音(規(guī)則的)

 

解決方法

1、在流動相、檢測器或泵中有空氣

1、流動相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。

2、漏液

2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換泵密封。

3、流動相混合不完全

3、用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑

4、溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱)

4、減少差異或加上熱交換器

5、在同一條線上有其他電子設(shè)備

5、斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正。

6、泵振動

6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器

N        基線噪音(不規(guī)則的)

 

解決方法

1、          漏液

1、見第三部分。檢查接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封。檢查流通池是否漏液。

2、流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成

2、檢查流動相的組成。

3、流動相各溶劑不相溶

3、選擇互溶的流動相

4、檢測器/記錄儀電子元件的問題

4、斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正。

5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡

5、用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)

6、檢測器內(nèi)有氣泡

6、清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器

7、流通池污染(即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音。)

7、用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池

8、檢測器燈能量不足

8、更換燈

9、色譜柱填料流失或阻塞

9、更換色譜柱

10、流動相混合不均勻或混合器工作不正常

10、維修或更換混合器,在流動相不走梯度時,建議不使用泵的混合裝置

O        寬峰

 

解決方法

1、流動相組成變化

1、重新制備新的流動相

2、流動相流速太低

2、調(diào)節(jié)流速

3、漏液(特別是在柱子和檢測器之間)

3、見section 3。檢查接頭是否松動、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。

4、檢測器設(shè)定不正確

4、調(diào)整設(shè)定

5、柱外效應(yīng)影響

a、柱子過載

b、檢測器對反應(yīng)時間或池體積響應(yīng)過大

c、柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大

d、記錄儀響應(yīng)時間太長

5、

a、 小體積進(jìn)樣(例如:10ul而不是100ul)以1101100的比例稀釋樣品

b、減少響應(yīng)時間或使用更小的流通池

c 使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路

d、減少響應(yīng)時間

6、緩沖液濃度太低

6、增加濃度

7、保護(hù)柱污染或失效

7、更換保護(hù)柱

8、色譜柱污染或失效,塔板數(shù)較低

8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱的色譜峰,則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。

9、柱入口塌陷

9、打開柱入口,填補(bǔ)塌陷或更換柱子

10、呈現(xiàn)兩個或多個未被完全分離的物質(zhì)的峰

10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果

11、柱溫過低

11、提高柱溫。除非特殊情況,溫度不宜超過75

12、檢測器時間常數(shù)太大

12、使用較小的時間常數(shù)

P         分離度降低

 

解決方法

1、流動相污染或變質(zhì)(引起保留時間變化)

1、重新配置流動相

2、保護(hù)柱或分析柱阻塞

2、去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要則更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞,可進(jìn)行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦颉H绻麊栴}仍然存在,進(jìn)口可能阻塞了,更換入口處的篩板或更換色譜柱。

Q、        所有的峰面積都太小

 

解決方法

1、檢測器衰減設(shè)定過高

1、減少衰減的設(shè)定

2、檢測器時間常數(shù)設(shè)定太大

2、設(shè)定較小的時間常數(shù)

3、進(jìn)樣量太少

3、增大進(jìn)樣量

4、記錄儀連接不當(dāng)

4、使用正確的連接

R、        所有的峰面積都太大

 

解決方法

1、檢測器衰減設(shè)定過低

1、采取較大的衰減

2、進(jìn)樣過多

2、減少進(jìn)樣量

3、記錄儀連接不正確

3、正確連接記錄儀

以下問題在使用進(jìn)樣閥過程中有可能發(fā)生。

A        手動進(jìn)樣閥,轉(zhuǎn)動不靈

 

解決方法

1、轉(zhuǎn)子密封損壞

1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封

2、轉(zhuǎn)子太緊

2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度

B、         手動進(jìn)樣閥,載樣困難

 

解決方法

1、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)

1、重新安裝

2、定量環(huán)阻塞

2、清洗或更換定量環(huán)

3、進(jìn)樣器污染

3、清洗或更換進(jìn)樣器

4、管路阻塞

4、清洗或更換管路

C、        自動進(jìn)樣閥,不能轉(zhuǎn)動

 

解決方法

1、無壓力(或電源)

1、提供恰當(dāng)?shù)膲毫Γ娫矗?o:p>

2、轉(zhuǎn)子太緊

2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度

3、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)

3、重新安裝

D        自動進(jìn)樣閥,其它問題

 

解決方法

1、阻塞

1、清洗或更換阻塞部件

2、機(jī)械故障

2、見隨機(jī)維修手冊

3、控制器故障

3、維修或更換控制器

由氣味、景象和聲音可以發(fā)現(xiàn)的問題

你需要運(yùn)用你所有的感官去發(fā)現(xiàn)液相色譜的問題。你最好養(yǎng)成習(xí)慣,每天花上幾分鐘運(yùn)用你的感官(除了味覺)來“感覺”你的液相色譜是否存在問題,這樣可以幫助你迅速找到問題所在。例如:在你看到漏液之前,你可能首先聞到它的氣味。大部分的問題是可以通過眼睛看到。

A、        溶劑的氣味

 

解決方法

1、漏液

1、見section 3

2、濺出

2a、檢查廢液瓶是否已滿

b、找到濺出的部位并清洗干凈

B、         熱氣味

 

解決方法

1、儀器過熱

1、a、檢查并調(diào)節(jié)通風(fēng)設(shè)施

b、檢查并調(diào)節(jié)溫度設(shè)定

c、關(guān)掉儀器,查找維修手冊

C        讀數(shù)不正常

 

解決方法

1、壓力不正常

1、見section 2

2、柱溫箱問題

2、

a、檢查并調(diào)節(jié)設(shè)定

b、參照用戶手冊

3、檢測器燈失效

3、更換燈

D、        燈警告

 

解決方法

1、壓力超出極限值

1、

a、檢查是否阻塞

b、檢查并調(diào)節(jié)極限值的設(shè)定

2、其它警示燈

2、見用戶手冊

E、         警告音

 

解決方法

1、溶劑泄漏/濺出

1、找到并解決

2、其它警告音

2、見用戶手冊

F、         刺耳的短音或長音

 

解決方法

1、軸承失效

1、見用戶手冊

2、潤滑不夠

2、進(jìn)行恰當(dāng)?shù)臐櫥?o:p>

3、機(jī)械故障

3、見用戶手冊

常見故障及日常維護(hù)

下表中列出了液相色譜常見的一些問題,右側(cè)中則列出的日常維護(hù)的方法可以減少問題出現(xiàn)的頻率。括號中的數(shù)字是建議進(jìn)行維護(hù)的時間間隔。用戶手冊則提供您更多的維護(hù)方法。

溶劑瓶

 

 護(hù)

1、進(jìn)口篩板阻塞

1、

a、更換(3-6個月)

b、過濾流動相,0.5u濾膜

2、氣泡

2、流動相脫氣

 

 護(hù)

1、氣泡

1、流動相脫氣

2、泵密封損壞

2、更換(3個月)

3、單向閥損壞

3、過濾流動相,運(yùn)用在線過濾,準(zhǔn)備備用單向閥

進(jìn)樣閥

 

 護(hù)

1、轉(zhuǎn)子密封損壞

1

a、不要擰的過緊

b、過濾樣品

色譜柱

 

 護(hù)

1、篩板阻塞

1、a、過濾流動相

b、過濾樣品

c、運(yùn)用在線過濾或保護(hù)柱

2、柱頭塌陷

2a、避免使用PH>8的流動相(針對大部分硅膠的柱子)

b、使用保護(hù)柱

c、使用預(yù)柱(飽和色譜柱)

檢測器

 

 護(hù)

1、燈失效,檢測器響應(yīng)降低,噪音增大

1、更換(6個月)或準(zhǔn)備備用燈

2、流通池有氣泡

2a、保持流通池清潔

b、池后使用反壓抑制器

c、流動相脫氣

一般

 

 護(hù)

1、腐蝕/摩擦損壞

1、在不使用時保持系統(tǒng)緩沖液的清潔

 

編輯:songjiajie2010

 
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