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1.所選用的流動相溶劑要有一定的化學(xué)穩(wěn)定性，不與固定相和樣品組分起反應(yīng)，其純度和化學(xué)特性必須滿足色譜過程的穩(wěn)定性和重復(fù)性的要求。
2.溶劑應(yīng)當(dāng)不干擾檢測器的工作，溶劑應(yīng)與檢測器匹配，選擇不影響檢測器正常工作應(yīng)選擇在測定波長范圍內(nèi)無吸收的流動相。
3.在制備分離中, 溶劑應(yīng)當(dāng)易于除去, 不干擾對分離組分的回收。
4.溶劑的粘度要小，保證合適的柱壓降。
5.從實用角度考慮，溶劑應(yīng)當(dāng)價格低廉，容易購得，使用安全，純度要高。
秘訣1由強(qiáng)到弱：
一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進(jìn)行試驗，這樣可以很快地得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的比例。
秘訣2三倍規(guī)則：
每減少10%的有機(jī)溶劑(甲醇或乙腈)的量，保留因子約增加3倍，此為三倍規(guī)則。這是一個聰明而又省力的辦法。調(diào)整的過程中，注意觀察各個峰的分離情況。
秘訣3粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)：
當(dāng)分離達(dá)到一定程度，應(yīng)將有機(jī)溶劑10%的改變量調(diào)整為5%，并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率，直至各組分的分離情況不再改變。
流動相的配制要點要記得
1.配制不含水的有機(jī)溶劑類流動相所用量筒應(yīng)區(qū)分開，必須是干燥的，不得有水。
2.流動相的抽濾。含水流動相和不含水流動相的抽濾裝置應(yīng)區(qū)分開。抽濾不含水的有機(jī)溶劑類流動相所用裝置必須是干燥的，不得有水。
3.超聲波震蕩，除氣泡。
4.使用0.04%的疊氮鈉溶液以防止流動相長菌。
將適量抽濾好的流動相倒入流動相專用儲液瓶，潤洗一次后倒入廢液瓶，再將剩余流動相全部倒入專用儲液瓶；填寫《流動相標(biāo)簽》，并將標(biāo)簽貼在儲液瓶上。更換流動相時應(yīng)及時更新《流動相標(biāo)簽》。
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流動相類別 |
效期 |
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純甲醇 |
3個月 |
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純乙腈 |
1個月 |
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5%的甲醇/乙腈水溶液 |
15天 |
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緩沖鹽溶液 |
3天 |
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純化水 |
1天 |
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甲醇與緩沖鹽混合溶液 |
7天 |
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乙腈與緩沖鹽混合溶液 |
7天 |
例如：純甲醇使用日期是2015年06月11日，有效期至2015年09月10日；甲醇與緩沖鹽混合溶液配制日期是2015年03月10日，有效期至2015年03月16日。
加鹽流動相做完實驗沖洗步驟：
先用50%純水和50%有機(jī)相沖洗，然后逐漸將有機(jī)相將低到10%甚至5%，最后用100%有機(jī)相沖洗封柱，整個過程1h以上。若是沖洗一晚上，則用5%甲醇以0.1ml/min以下的低流速沖洗。
10%異丙醇在線沖洗密封墊：
10%異丙醇需定期更換，流動相不加鹽時，周期可以設(shè)置1min，沖洗0.2min；流動相加鹽時，周期設(shè)置1min，沖洗0.5min，最大為0.7min（長期處于最大值會導(dǎo)致蠕動泵磨損）。
流動相更換：
流動相瓶必須清洗干凈，含水流動相需定期更換避免長菌，純水2天換一次，進(jìn)樣前和實驗過程中需不定時觀察流動相有無沉淀。
流動相瓶清洗：
先用酸液浸泡，然后用大量的自來水沖洗，接著用蒸餾水涮3次以上，最后一次用哇哈哈水潤洗。
溶劑中的雜質(zhì)會導(dǎo)致出現(xiàn)“鬼峰”，特別是梯度解吸時。
溶劑混合產(chǎn)生的問題：
樣品的溶解：
流動相過濾頭產(chǎn)生的問題
緩沖液的使用：
使用前必須過濾;
使用后一定要進(jìn)行清洗 ，以免造成腐蝕、磨損、阻塞:用純水沖洗30-60min（1ml/min），再用甲醇沖洗30min;
易受到細(xì)菌和霉菌的影響。
注意：不能直接用有機(jī)溶劑沖洗。
更換互溶流動相時注意清洗吸濾頭；
更換不互溶流動相時必須用中間過渡液清洗系統(tǒng)，例如異丙醇；
更換緩沖液時，應(yīng)用純水過渡；
更換流動相后應(yīng)使用PURGE鍵快速排液。排去殘液或氣泡。
注意緩沖液的pH值與使用的色譜柱匹配
緩沖液必須過濾膜；
使用緩沖液期間，用注射器推純水，清洗柱塞桿，延長泵密封墊壽命；
分析完后用純水清洗系統(tǒng)。
自動進(jìn)樣器清洗液
如選擇不當(dāng)重現(xiàn)性不好；
常用1：1的甲醇水或不含鹽的流動相；
清洗液必須過濾，經(jīng)常更換；
清洗液需對樣品有一定的溶解度；
不可用乙腈作為自動進(jìn)樣器的清洗液。
1、如果不是做梯度洗脫，必須將有機(jī)相和水相分別配置的話。盡可能用混合好的流動相，而不是用靠儀器混合。尤其是水相為磷酸鹽溶液的時候，磷酸鹽溶液可是細(xì)菌的“培養(yǎng)基”哦，在夏天基本上1個晚上過來，里面就有肉眼可見菌團(tuán)了。
2、如果非得用純的水相作為流動相（通常是做梯度的時候），那么注意務(wù)：必每天做完實驗后將水相的管路用純水沖洗干凈，用有機(jī)相保存（如果水相不含鹽，直接用有機(jī)溶劑替換即可）。
3、如果有可能，請用煮沸過的水制備水相。
4、即使是混合好的流動相，如果水相含鹽，有機(jī)相比例不高，那么也需要定期檢查，尤其是在夏天的時候。
文章（文字）來源：化學(xué)掌中寶。
