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薄層色譜分析法，是利用各成分對(duì)同一吸附劑（如硅膠）吸附能力不同，使得流動(dòng)相（溶劑）流過吸附劑過程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達(dá)到各成分互相分離。在化工領(lǐng)域中，有一種層析分離技術(shù)非常出名，就是薄層色譜法，也叫薄層層析，這是一種快速分離化學(xué)物質(zhì)的最有效層析方法，它的工作原理就是利用吸附各成分，使其達(dá)到互相分離的目的。針對(duì)此種技術(shù)，今天小析姐就來給大家介紹一下薄層色譜法的5個(gè)步驟、rf值、用途及注意事項(xiàng)。
薄層色譜法的5個(gè)步驟
步驟一：薄層板制備除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(厚度為0.2～0.3mm)，取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干，后在110℃烘30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。手工制板一般分不含粘合劑的軟板和含粘合劑的硬板兩種。
步驟二：薄層板的活化硅膠板于105-110℃烘30分鐘，氧化鋁板于150-160℃烘4小時(shí)，可得活性的薄層板。
步驟三：點(diǎn)樣點(diǎn)樣方式：分為手動(dòng)點(diǎn)樣和自動(dòng)點(diǎn)樣。手動(dòng)點(diǎn)樣主要器具為微量毛細(xì)管、微量注射器等。自動(dòng)點(diǎn)樣采用半自動(dòng)點(diǎn)樣儀或全自動(dòng)點(diǎn)樣儀，按預(yù)設(shè)程序自動(dòng)點(diǎn)樣。手動(dòng)點(diǎn)樣靈活方便，常用于各種TCL鑒別中，器具以微量毛細(xì)管最常用。儀器的自動(dòng)點(diǎn)樣準(zhǔn)確性好，常用于薄層掃描法的含量測(cè)定。
點(diǎn)樣方法：分為接觸式點(diǎn)樣和噴霧點(diǎn)樣。噴霧點(diǎn)樣為儀器控制，在此不展開描述。接觸式手工點(diǎn)樣時(shí)，應(yīng)注意小心用點(diǎn)樣器垂直接觸薄層板表面以防止損傷板面。若薄層吸附劑表面被損壞或點(diǎn)成洼孔，則展開后斑點(diǎn)成不規(guī)則形狀；靠近溶劑前沿的化合物形成三角形，靠近原點(diǎn)的化合物形成新月形，影響測(cè)定結(jié)果。原點(diǎn)損失帶來誤差，也將使展開后的定量和判斷不準(zhǔn)確。
步驟四：展開
展開劑的配制：配制展開劑時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格控制其比例準(zhǔn)確度，如遇到比例很小的溶劑時(shí)，應(yīng)盡量滿足其精確度要求，而不是為圖方便省事直接用滴管加入。展開劑配好后如果渾濁不清，不能立即使用。應(yīng)轉(zhuǎn)移入分液漏斗中，待其靜置分層澄清后再取其上層(或下層)液進(jìn)行展開。
步驟五：顯色薄層板顯色方法有哪些？主要有三種方法，分別是蒸汽顯色法、物理顯色法和試劑顯色法。
薄層色譜法的rf值rf值指的是溶質(zhì)移動(dòng)的距離/溶液移動(dòng)的距離。表示物質(zhì)移動(dòng)的相對(duì)距離。
各種物質(zhì)的Rf隨要分離化合物的結(jié)構(gòu)，濾紙或薄層板的種類、溶劑、溫度等不同而不同，但在條件固定的情況下，Rf對(duì)每一種化合物來說是一個(gè)特定數(shù)值。
薄層色譜法的用途有哪些？主要有以下三大用途，一起來看看吧！
用途一：快速分離兩種物質(zhì)；
用途二：鑒定少量有機(jī)物的組成；
用途三：跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。
薄層色譜注意事項(xiàng)
薄層色譜法的注意事項(xiàng)有哪些？主要有以下幾個(gè)注意事項(xiàng)。注意事項(xiàng)一：所用玻璃板應(yīng)洗凈不掛水珠，光滑平整；
注意事項(xiàng)二：鋪板要均勻，厚度適宜，并于室溫下晾干后在110℃活化30分鐘，置于有干燥劑的干燥箱或干燥器中備用；注意事項(xiàng)三：點(diǎn)樣點(diǎn)一般為圓點(diǎn)，不能太大。TLC操作方便，高效，在有機(jī)合成中主要有以下作用：
1、反應(yīng)原料投料前判斷原料純度。
2、監(jiān)控反應(yīng)反應(yīng)是否有新點(diǎn)生成。
原料是否反應(yīng)完全。
3、后處理通過TLC預(yù)先判斷后處理（如淬滅、中和）方法的合理性，例如：是否破壞產(chǎn)物。
萃取、結(jié)晶等后處理過程的監(jiān)測(cè)。
4、選擇柱層析的洗脫條件待分離組分Rf值在0.2左右的展開劑比例為洗脫劑的合適值。
5、初步判斷反應(yīng)產(chǎn)物的純度5%以上的有紫外吸收的雜質(zhì)通常在TLC中都可以觀測(cè)。
TLC 也是一項(xiàng)考驗(yàn)技術(shù)的分析方法，在使用薄層板的過程中，我們通常會(huì)遇到一些問題，小編進(jìn)行了總結(jié)并給出了一些解決的方法，供大家參考：
（一） 官能團(tuán)轉(zhuǎn)化與展開劑極性變化關(guān)系官能團(tuán)轉(zhuǎn)化1，極性增大：RNO2→NH2RNHBn (Boc, Cbz)→RNH2RX→RCNRCHO（R-X）→CH2OH2，極性減�。篟-OH→R-X (Cl, Br, I)RCOOH→RCO2R RC-NH2→RC-H隨著反應(yīng)官能團(tuán)的轉(zhuǎn)化，當(dāng)產(chǎn)物極性變化比較大，在TLC中Rf＜0.2時(shí)，為了準(zhǔn)確判斷，展開劑極性需要適當(dāng)增大，反之，當(dāng)極性變小Rf＞0.6，展開劑極性需要適當(dāng)調(diào)小。展開劑配比需要結(jié)合官能團(tuán)的極性大小去調(diào)試,具體調(diào)試方法見下圖：
展開劑
上圖，展開劑體系調(diào)試
常用一般極性的體系：PE/EA。常用極性較大的體系：DCM/CH3OH。當(dāng)常用體系對(duì)某些化合物分離度不明顯時(shí)，某些溶劑間按一定比例混合可能會(huì)有比較好的分離效果：PE/DCM,PE/Acetone,Toluene/Acetone,DCM/EA,EA/CH3OH等。PS：有些反應(yīng)產(chǎn)物極性變化很�。≧CH3→RCH2X），可能需要單向多次展開。
小編給大家整理常見官能團(tuán)與溶劑極性變化關(guān)系：
附1：常用官能團(tuán)極性比較烷烴（-CH3,-CH2-）＜烯烴（-CH=CH-）＜醚類（-OCH3，-OCH2-）＜硝基化合物（-NO2）＜二甲胺（-N(CH3)2）＜脂類（-COOR）＜酮類（-CO-）＜醛類（-CHO）＜硫醇（-SH）＜胺類（-NH2）＜酰胺（-NHCOCH3）＜醇類（R-OH）＜酚類（Ar-OH）＜羧酸類（-COOH）。
附2：常用展開劑極性順序石油醚＜甲苯＜二氯甲烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜正丁醇＜四氫呋喃＜二氧六環(huán)＜丙酮＜甲醇＜乙腈＜水。（二）拖尾現(xiàn)象及解決方法
TLC點(diǎn)板的點(diǎn)應(yīng)該是圓形，但是實(shí)際操作過程中經(jīng)常會(huì)到如上圖2的情況，原因分析：
1、樣品過載首先考慮樣品濃度過大，薄層板過載，可嘗試降低樣品濃度或減少上樣量。
2、硅膠與樣品吸附能力較強(qiáng)
硅膠與酸性或堿性化合物之間吸附能力較強(qiáng)，在TLC過程中可能存在分子和離子兩種狀態(tài)，使得吸附不完全，造成拖尾現(xiàn)象。（1）酸性化合物：在分析酸類化合物，需要在展開劑中加入0.1%-0.5%醋酸或者甲酸，可以增強(qiáng)展開劑的極性，也可以抑制羧酸的電離。（2）堿性化合物：與酸類化合物原理類似，在展開劑中加入0.1%-0.5%的氨水或者三乙胺（氨水比三乙胺好去除），還有一種方法就是選購(gòu)樂研堿性硅膠板，分析板和制備板均有哦，也可以為您量身定制。
3、溶解度如圖6，樣品點(diǎn)呈長(zhǎng)帶狀，很可能是由溶解度引起的：（1）樣品未完全溶解：點(diǎn)樣樣品一定要是溶液形式，若是難溶物，選擇大極性溶劑溶解，用吹風(fēng)機(jī)（或者氮?dú)饬鳎⿲⑷軇┐蹈珊笤僬归_。（2）展開劑對(duì)樣品的溶解性不好，可以通過更換展開劑的體系來改善：常用展開劑的溶劑之間可以混搭，不僅限于兩種，也可三種以上，具體條件要結(jié)合底物性質(zhì)，各種搭配需要大家去嘗試；對(duì)于大極性化合物，如氨基酸類的，需要大極性展開劑，正丁醇/醋酸/水、異丙醇/氨水/水等。
4、硅膠板含水硅膠板長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中，容易吸潮，點(diǎn)樣展開后可能會(huì)有拖尾，這種情況，建議使用前用烘箱100℃活化10min。 文章來源：化學(xué)寶庫(kù) 藥物分析學(xué)社
薄層色譜法的5個(gè)步驟
步驟一：薄層板制備除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(厚度為0.2～0.3mm)，取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干，后在110℃烘30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。手工制板一般分不含粘合劑的軟板和含粘合劑的硬板兩種。
步驟二：薄層板的活化硅膠板于105-110℃烘30分鐘，氧化鋁板于150-160℃烘4小時(shí)，可得活性的薄層板。
步驟三：點(diǎn)樣點(diǎn)樣方式：分為手動(dòng)點(diǎn)樣和自動(dòng)點(diǎn)樣。手動(dòng)點(diǎn)樣主要器具為微量毛細(xì)管、微量注射器等。自動(dòng)點(diǎn)樣采用半自動(dòng)點(diǎn)樣儀或全自動(dòng)點(diǎn)樣儀，按預(yù)設(shè)程序自動(dòng)點(diǎn)樣。手動(dòng)點(diǎn)樣靈活方便，常用于各種TCL鑒別中，器具以微量毛細(xì)管最常用。儀器的自動(dòng)點(diǎn)樣準(zhǔn)確性好，常用于薄層掃描法的含量測(cè)定。
點(diǎn)樣方法：分為接觸式點(diǎn)樣和噴霧點(diǎn)樣。噴霧點(diǎn)樣為儀器控制，在此不展開描述。接觸式手工點(diǎn)樣時(shí)，應(yīng)注意小心用點(diǎn)樣器垂直接觸薄層板表面以防止損傷板面。若薄層吸附劑表面被損壞或點(diǎn)成洼孔，則展開后斑點(diǎn)成不規(guī)則形狀；靠近溶劑前沿的化合物形成三角形，靠近原點(diǎn)的化合物形成新月形，影響測(cè)定結(jié)果。原點(diǎn)損失帶來誤差，也將使展開后的定量和判斷不準(zhǔn)確。
步驟四：展開
展開劑的配制：配制展開劑時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格控制其比例準(zhǔn)確度，如遇到比例很小的溶劑時(shí)，應(yīng)盡量滿足其精確度要求，而不是為圖方便省事直接用滴管加入。展開劑配好后如果渾濁不清，不能立即使用。應(yīng)轉(zhuǎn)移入分液漏斗中，待其靜置分層澄清后再取其上層(或下層)液進(jìn)行展開。
步驟五：顯色薄層板顯色方法有哪些？主要有三種方法，分別是蒸汽顯色法、物理顯色法和試劑顯色法。
薄層色譜法的rf值rf值指的是溶質(zhì)移動(dòng)的距離/溶液移動(dòng)的距離。表示物質(zhì)移動(dòng)的相對(duì)距離。
各種物質(zhì)的Rf隨要分離化合物的結(jié)構(gòu)，濾紙或薄層板的種類、溶劑、溫度等不同而不同，但在條件固定的情況下，Rf對(duì)每一種化合物來說是一個(gè)特定數(shù)值。
薄層色譜法的用途有哪些？主要有以下三大用途，一起來看看吧！
用途一：快速分離兩種物質(zhì)；
用途二：鑒定少量有機(jī)物的組成；
用途三：跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。
薄層色譜注意事項(xiàng)
薄層色譜法的注意事項(xiàng)有哪些？主要有以下幾個(gè)注意事項(xiàng)。注意事項(xiàng)一：所用玻璃板應(yīng)洗凈不掛水珠，光滑平整；
注意事項(xiàng)二：鋪板要均勻，厚度適宜，并于室溫下晾干后在110℃活化30分鐘，置于有干燥劑的干燥箱或干燥器中備用；注意事項(xiàng)三：點(diǎn)樣點(diǎn)一般為圓點(diǎn)，不能太大。TLC操作方便，高效，在有機(jī)合成中主要有以下作用：
1、反應(yīng)原料投料前判斷原料純度。
2、監(jiān)控反應(yīng)反應(yīng)是否有新點(diǎn)生成。
原料是否反應(yīng)完全。
3、后處理通過TLC預(yù)先判斷后處理（如淬滅、中和）方法的合理性，例如：是否破壞產(chǎn)物。
萃取、結(jié)晶等后處理過程的監(jiān)測(cè)。
4、選擇柱層析的洗脫條件待分離組分Rf值在0.2左右的展開劑比例為洗脫劑的合適值。
5、初步判斷反應(yīng)產(chǎn)物的純度5%以上的有紫外吸收的雜質(zhì)通常在TLC中都可以觀測(cè)。
TLC 也是一項(xiàng)考驗(yàn)技術(shù)的分析方法，在使用薄層板的過程中，我們通常會(huì)遇到一些問題，小編進(jìn)行了總結(jié)并給出了一些解決的方法，供大家參考：
（一） 官能團(tuán)轉(zhuǎn)化與展開劑極性變化關(guān)系官能團(tuán)轉(zhuǎn)化1，極性增大：RNO2→NH2RNHBn (Boc, Cbz)→RNH2RX→RCNRCHO（R-X）→CH2OH2，極性減�。篟-OH→R-X (Cl, Br, I)RCOOH→RCO2R RC-NH2→RC-H隨著反應(yīng)官能團(tuán)的轉(zhuǎn)化，當(dāng)產(chǎn)物極性變化比較大，在TLC中Rf＜0.2時(shí)，為了準(zhǔn)確判斷，展開劑極性需要適當(dāng)增大，反之，當(dāng)極性變小Rf＞0.6，展開劑極性需要適當(dāng)調(diào)小。展開劑配比需要結(jié)合官能團(tuán)的極性大小去調(diào)試,具體調(diào)試方法見下圖：
展開劑
上圖，展開劑體系調(diào)試
常用一般極性的體系：PE/EA。常用極性較大的體系：DCM/CH3OH。當(dāng)常用體系對(duì)某些化合物分離度不明顯時(shí)，某些溶劑間按一定比例混合可能會(huì)有比較好的分離效果：PE/DCM,PE/Acetone,Toluene/Acetone,DCM/EA,EA/CH3OH等。PS：有些反應(yīng)產(chǎn)物極性變化很�。≧CH3→RCH2X），可能需要單向多次展開。
小編給大家整理常見官能團(tuán)與溶劑極性變化關(guān)系：
附1：常用官能團(tuán)極性比較烷烴（-CH3,-CH2-）＜烯烴（-CH=CH-）＜醚類（-OCH3，-OCH2-）＜硝基化合物（-NO2）＜二甲胺（-N(CH3)2）＜脂類（-COOR）＜酮類（-CO-）＜醛類（-CHO）＜硫醇（-SH）＜胺類（-NH2）＜酰胺（-NHCOCH3）＜醇類（R-OH）＜酚類（Ar-OH）＜羧酸類（-COOH）。
附2：常用展開劑極性順序石油醚＜甲苯＜二氯甲烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜正丁醇＜四氫呋喃＜二氧六環(huán)＜丙酮＜甲醇＜乙腈＜水。（二）拖尾現(xiàn)象及解決方法
TLC點(diǎn)板的點(diǎn)應(yīng)該是圓形，但是實(shí)際操作過程中經(jīng)常會(huì)到如上圖2的情況，原因分析：
1、樣品過載首先考慮樣品濃度過大，薄層板過載，可嘗試降低樣品濃度或減少上樣量。
2、硅膠與樣品吸附能力較強(qiáng)
硅膠與酸性或堿性化合物之間吸附能力較強(qiáng)，在TLC過程中可能存在分子和離子兩種狀態(tài)，使得吸附不完全，造成拖尾現(xiàn)象。（1）酸性化合物：在分析酸類化合物，需要在展開劑中加入0.1%-0.5%醋酸或者甲酸，可以增強(qiáng)展開劑的極性，也可以抑制羧酸的電離。（2）堿性化合物：與酸類化合物原理類似，在展開劑中加入0.1%-0.5%的氨水或者三乙胺（氨水比三乙胺好去除），還有一種方法就是選購(gòu)樂研堿性硅膠板，分析板和制備板均有哦，也可以為您量身定制。
3、溶解度如圖6，樣品點(diǎn)呈長(zhǎng)帶狀，很可能是由溶解度引起的：（1）樣品未完全溶解：點(diǎn)樣樣品一定要是溶液形式，若是難溶物，選擇大極性溶劑溶解，用吹風(fēng)機(jī)（或者氮?dú)饬鳎⿲⑷軇┐蹈珊笤僬归_。（2）展開劑對(duì)樣品的溶解性不好，可以通過更換展開劑的體系來改善：常用展開劑的溶劑之間可以混搭，不僅限于兩種，也可三種以上，具體條件要結(jié)合底物性質(zhì)，各種搭配需要大家去嘗試；對(duì)于大極性化合物，如氨基酸類的，需要大極性展開劑，正丁醇/醋酸/水、異丙醇/氨水/水等。
4、硅膠板含水硅膠板長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中，容易吸潮，點(diǎn)樣展開后可能會(huì)有拖尾，這種情況，建議使用前用烘箱100℃活化10min。 文章來源：化學(xué)寶庫(kù) 藥物分析學(xué)社
