固相萃取柱回收率低？一文幫你解決固相萃取過程中的所有問題！
發(fā)布日期：2022-06-17
核心提示：近年來，固相萃取小柱應(yīng)用得到快速發(fā)展，已廣泛應(yīng)用于食品、環(huán)境、制藥等行業(yè)，成為樣品前處理凈化的有效手段之一。可是，用戶在使用固相萃取小柱過程中也會遇到各種各樣的問題。
根據(jù)多年的實驗應(yīng)用經(jīng)驗，現(xiàn)將使用過程中常見問題及解決辦法整理在一起，方便大家輕松應(yīng)對固相萃取常見問題。
固相萃取小柱是一種用途廣泛而且越來越受歡迎的樣品前處理技術(shù)。大多數(shù)用來處理液體樣品。萃取、濃縮和凈化其中的半揮發(fā)性和不揮發(fā)性化合物；也可用于固體樣品，但必須先把固體樣品處理成液體。
固相萃取柱的種類很多，具體實驗工作中，需根據(jù)分析對象、檢測手段及實驗室條件合理選擇合適填料、合理規(guī)格的固相萃取柱。要考慮固相萃取柱對分析對象的萃取能力、樣品溶液的體積、洗脫后溶液的最終體積、及樣品溶液中被測物及干擾物的總量。
一般被柱中吸附劑吸附的被測物及干擾物的總質(zhì)量不應(yīng)超過吸附物總質(zhì)量的5%。洗脫劑的體積一般應(yīng)是萃取柱柱床體積的2-5倍。
固相萃取小柱使用過程可以簡要為4步：
首先，我們要知道一個樣品包括目標物和干擾物，樣品通過吸附劑，將目標物與干擾物分離，留下需要的干擾物，棄掉不要的干擾物，這就完成一次簡單的固相萃取過程。第一步：利用洗脫劑潤洗固相萃取柱，洗掉柱子中原有的雜志組分；
第二步：將樣品加到萃取柱上，吸附劑選擇性的保留分離物和一些干擾物，其他干擾物通過吸附劑；
第三步：用適當?shù)娜軇┝芟次絼�，使先前保留的干擾物選擇性的淋洗掉，分離物保留在吸附劑床上。
在一次完整的SPE操作中，目標化合物可能會存在于樣品溶液流出液、淋洗液、洗脫液或吸附劑中，當“目標物沒有回收或回收率低” 現(xiàn)象發(fā)生時，可向樣品溶液加入標液，然后進行完整的SPE操作并將樣品流出液、淋洗液和洗脫液分別收集并分析。首先確定目標化合物存在于哪一部分，進而確定問題來自下列哪一環(huán)節(jié)：目標化合物在吸附劑上保留不足；目標化合物未被完全洗脫；其他環(huán)節(jié)。
當超過5%的目標化合物出現(xiàn)在樣品流出液或淋洗液時即可斷定“目標化合物在吸附劑上的保留不足”。
2、目標化合物未被完全洗脫
當目標化合物在樣品溶液流出液和淋洗液中未出現(xiàn)而洗脫液中僅有少量或未出現(xiàn)時，可判斷“目標物未被完全洗脫”。
如果目標化合物在洗脫液中正常出現(xiàn)，那么回收率不足的問題應(yīng)該來自樣品前處理的其他環(huán)節(jié)。
在使用固相萃取小柱進行樣品前處理時，若出現(xiàn)萃取效果重現(xiàn)性差
三、凈化效果不理想
通常而言采用保留目標化合物的模式比保留雜質(zhì)的模式凈化效果好，如果正在分析的項目為某一種或某一類化合物分析，最好是采用保留目標化合物的凈化模式；舉一個簡單的例子，同樣是分析蔬菜中的多菌靈和噻菌靈(一類堿性農(nóng)藥)，使用陽離子交換柱可以專一性地保留這些農(nóng)藥，使它們基本與干擾物完全分離，而使用正相吸附劑或石墨化炭黑進行保留干擾物的操作僅能把主要的干擾物除去，仍有較多干擾物存留。
另外，如果不止一種SPE柱可用于目標化合物的凈化時，應(yīng)挑選選擇性好的吸附劑；選擇性方面，離子交換＞正相＞反相。
對于反相模式和正相模式，應(yīng)在不影響回收率的前提下，增大淋洗液洗脫的強度并降低洗脫液的洗脫強度。
對于反相模式，可將目標化合物的水溶液上樣，然后依次用5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%的甲醇水溶液洗脫，分別收集洗脫液分析，建立淋洗曲線，找出目標化合物被洗脫時的溶劑體系，淋洗液中甲醇的含量應(yīng)稍低于目標化合物恰好被洗脫時的溶劑體系，而洗脫液中甲醇的含量應(yīng)稍高于目標化合物恰好被完全洗脫時的溶劑體系；當純甲醇不能洗脫目標化合物時，應(yīng)試驗甲醇-甲基叔丁基醚混合溶液的洗脫曲線；對于某些既不溶于水也不溶于甲醇的離子型化合物，可以在溶劑體系中加入酸或堿。
對于正相體系，可將目標化合物的正己烷溶液上樣，然后依次用5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%的正己烷甲基叔丁基醚溶液洗脫，分別收集洗脫液分析，建立淋洗曲線，找出目標化合物被洗脫時的溶劑體系，淋洗液中甲基叔丁基醚的含量應(yīng)稍低于目標化合物恰好被洗脫時的溶劑體系，而洗脫液中甲基叔丁基醚的含量應(yīng)稍高于目標化合物恰好被完全洗脫時的溶劑體系。
SPE柱中的吸附劑可能存在少量干擾物，有效地活化可以避免這些干擾物進入洗脫液，活化溶液應(yīng)選擇整個操作中洗脫強度最強的溶劑體系；在反相模式中，從樣品溶液到洗脫液主要涉及0%-100%甲醇水溶液，所以活化溶液應(yīng)選純甲醇，當目標化合物需要用甲醇-甲基叔丁基醚混合液洗脫時，活化溶液應(yīng)選甲基叔丁基醚；在正相模式中，從樣品溶液到洗脫液主要涉及0%-100%正己烷-甲基叔丁基醚溶液，所以活化溶液應(yīng)選純甲基叔丁基醚。
編輯：songjiajie2010
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