01柱色譜
為向玻璃管中填入固定相，以流動(dòng)相溶劑浸潤(rùn)后在上方倒入待分離的溶液，再滴加流動(dòng)相，因?yàn)榇�分離物質(zhì)對(duì)固定相的吸附力不同，吸附力大的固著不動(dòng)或移動(dòng)緩慢，吸附力小的被流動(dòng)相溶劑洗下來(lái)隨流動(dòng)相向下流動(dòng)，從而實(shí)現(xiàn)分離。

02紙色譜
以濾紙條為固定相，在紙條上點(diǎn)上待分離的混合溶液的樣點(diǎn)，將紙條下端浸入流動(dòng)相溶劑中懸掛，溶劑因?yàn)槊��?xì)作用沿濾紙條上升，樣點(diǎn)中的溶質(zhì)從而被分離。

03薄層色譜

是在玻璃板上涂以固定相涂層，然后點(diǎn)樣，下端浸入溶劑，同樣自下而上分離。常用于探索柱色譜實(shí)驗(yàn)條件，溶劑和固定相的選擇等。

常用固定相有石膏、氧化鋁、蔗糖、淀粉等，常用流動(dòng)相為水、苯等各種有機(jī)溶劑。

影響色譜柱使用壽命的主要因素

流動(dòng)相因素

1.流動(dòng)相pH

不同基質(zhì)的填料具有不同的pH適用范圍。常溫下無(wú)定形硅膠在純水中的溶解度約為100mg·L-1，且在pH1～9的范圍內(nèi)溶解的硅膠量幾乎是常量，考慮到溶解速度的影響,對(duì)于硅膠基質(zhì)的填料,其所能承受的流動(dòng)相pH范圍約為1～8。

鍵合相硅膠填料則由于鍵合層的屏蔽作用,使填料對(duì)流動(dòng)相的適應(yīng)范圍大大增加，如現(xiàn)在廣泛使用的反相色譜填料C18(十八烷基硅烷鍵合硅膠)，其pH適用范圍可達(dá)2～10。當(dāng)流動(dòng)相pH值超出酸性范圍時(shí)，鍵合相易發(fā)生水解而流失；當(dāng)流動(dòng)相pH超出堿性范圍時(shí)，會(huì)加速硅膠的溶解而釋放出絮狀物堵塞柱子，這兩種反應(yīng)均是不可逆反應(yīng)，特別是在溫度較高>40℃）的環(huán)境下，會(huì)使柱效迅速降低而報(bào)廢。

2.流動(dòng)相變質(zhì)

當(dāng)前使用最為廣泛的是硅基鍵合相填料，當(dāng)以水溶液作為流動(dòng)相或流動(dòng)相中含有一定濃度的磷酸鹽緩沖液時(shí)，水溶液中或緩沖鹽溶液中會(huì)滋生出一些細(xì)菌或霉菌，從而堵塞固定相顆粒間的空隙。特別是對(duì)于多元自動(dòng)比例混合的高效液相色譜儀來(lái)說(shuō),水相或緩沖鹽相獨(dú)立存貯，因存放時(shí)間較長(zhǎng)而容易發(fā)生此類(lèi)問(wèn)題。

3.流動(dòng)相純度

目前，廣泛使用的填料顆粒粒徑范圍在3～10μm,孔徑在6～10nm,色譜柱在使用中會(huì)有大量的流動(dòng)相通過(guò),如流動(dòng)相含有微量不溶性雜質(zhì)顆粒,則很容易在柱頭部位被截留,久而久之,造成色譜柱機(jī)械性堵塞,引起柱壓升高而無(wú)法正常使用。

4.其它因素

如，流動(dòng)相的極性對(duì)柱子也有一定影響，甲醇、水、冰醋酸等極性較大的物質(zhì)會(huì)破壞硅膠填料柱，正丁醇、二氯甲烷等極性小的物質(zhì)會(huì)破壞化學(xué)鍵合硅膠柱，堿性溶液會(huì)破壞陽(yáng)離子交換樹(shù)脂色譜柱,酸性溶液容易損壞陰離子交換樹(shù)脂柱。

樣品因素

1.樣品的溶解性

樣品試樣在配制中，如有少量微粒未能完全溶解，則會(huì)隨試樣一起進(jìn)入色譜柱，同樣，會(huì)沉積在柱頭處，造成色譜柱的堵塞。

2.樣品的純度

樣品中可能含有待分析組分以外的各種組分或雜質(zhì)，這些組分或雜質(zhì)可能會(huì)在柱內(nèi)產(chǎn)生不可逆吸附，從而，使固定相的活性點(diǎn)被覆蓋，保留特性發(fā)生變化。

3.樣品的化學(xué)性質(zhì)

待測(cè)試樣中的各種組分與填料之間應(yīng)具有化學(xué)穩(wěn)定性，比較典型的是在使用氨基鍵合柱時(shí)，應(yīng)避免使用含羰基的化合物和流動(dòng)相，如，丙酮、乙酸乙酯等，以免固定相中的NH2和酐、酮發(fā)發(fā)希夫(Schiff)縮合而使固定相破壞。

其它因素

影響色譜柱壽命的因素很多，除流動(dòng)相和樣品因素外，還有其它一些外在因素，如柱壓的影響，溫度的影響，色譜柱的正確沖洗，色譜柱的正確安裝等。

色譜柱出現(xiàn)問(wèn)題的解決辦法

色譜柱在使用中最常見(jiàn)的問(wèn)題就是柱壓升高，如果柱壓是在長(zhǎng)時(shí)間使用過(guò)程中緩慢增加，屬于正�，F(xiàn)象。但柱壓在使用過(guò)程中突然升高（系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外），以下列舉了部分常見(jiàn)原因及解決辦法：

1.色譜柱頭的過(guò)濾篩板堵塞或污染。

解決方法：如確定是色譜柱頭的過(guò)濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10％的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。

2.色譜柱頭的填料被樣品污染。

解決方法：如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細(xì)修復(fù)后，重新安裝上柱頭螺絲。

3.色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑，形成結(jié)晶析出。

解決方法：如確定定是鹽結(jié)晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。

4.流動(dòng)相pH值過(guò)大或過(guò)小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。

解決方法：如果因pH值使用不當(dāng)，很難恢復(fù)。

色譜柱的八大注意事項(xiàng)

1.避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此，在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。

2.應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿�部是水，反之亦然�?/span>

3.一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。

4.選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH)，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

5.經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。

6.保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿(mǎn)乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。

7.色譜柱使用過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。在后兩種情況發(fā)生時(shí)，小心擰開(kāi)柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1～2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當(dāng)溶劑濕潤(rùn)的固定相(與柱內(nèi)相同)填滿(mǎn)色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復(fù)到新柱的水平。

柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5～30mm)，可以起到保護(hù)、延長(zhǎng)柱壽命的作用。采用保護(hù)柱會(huì)損失一定的柱效，這是值得的。通常色譜柱壽命在正確使用時(shí)可達(dá)2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH=2～9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時(shí)間后，可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀?/font>

8.新的色譜柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時(shí)也可補(bǔ)加填料使柱效恢復(fù)。每次工作完后，最好用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如，ODS柱宜用甲醇沖洗至基線(xiàn)平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應(yīng)用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會(huì)腐蝕不銹鋼管道，不宜長(zhǎng)期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4～5天開(kāi)機(jī)沖洗15分鐘。

色譜柱不使用時(shí)應(yīng)該怎樣保存？

如果色譜柱不使用，又該如何進(jìn)行保存呢？下列方法可供參考：

在柱二端包起來(lái)，放到盒子里室溫避光保存。毛細(xì)管柱可以用廢舊的隔墊裁成二塊，分別插在毛細(xì)管二段。填充柱用小塑料袋套住，再用細(xì)金屬絲扎起來(lái)。因?yàn)榉治鍪矣性S多化學(xué)試劑，特別在櫥內(nèi)會(huì)有些氣味，這樣能較好保管色譜柱。放置時(shí)也要有序放置，毛細(xì)管柱還是用盒子裝好以免壓壞，在放置時(shí)在柱上和記錄本上都做好記錄。

拆下后，兩頭用橡膠墊密封，橡膠墊原本色譜盒子就帶有，如果沒(méi)有，用進(jìn)樣墊制作一下就可以了，然后裝在原來(lái)的色譜盒子里面，備注上相應(yīng)的信息。通常要求放在干燥的地方，下次使用時(shí)，切記進(jìn)樣端和出口端不能裝反。