膠原蛋白的純化工藝應(yīng)根據(jù)表達系統(tǒng)和應(yīng)用需求選擇。若在構(gòu)建時設(shè)計了標(biāo)簽，可采用親和層析進行高效純化；若無標(biāo)簽，則可根據(jù)膠原蛋白與雜蛋白的電荷、疏水性及分子大小等差異，選擇離子交換層析、疏水層析、凝膠過濾層析等方式，或通過復(fù)合模式層析進一步提高純度。這些方法可靈活調(diào)整，以滿足不同的應(yīng)用和純度需求。

親和層析是一種基于特異性結(jié)合的分離方法，常用于重組膠原蛋白的初步純化。通過在表達的膠原蛋白中插入標(biāo)簽，如His標(biāo)簽，對目標(biāo)蛋白進行特異性結(jié)合捕獲。

Ni²⁺對His標(biāo)簽具有特異性親和，可以使用博格隆Ni Bestarose FF或Ni Bestarose HP等已鰲合金屬離子的親和填料進行捕獲，通常一步可達到80%以上的純度，雜質(zhì)去除效果好。隨后，再使用分子篩進行精純以及濃縮換液，得到膠原蛋白原液。