蛋白濃度測(cè)定的方法有很多,但每種方法都有其特點(diǎn)和局限性,因而需要在了解各種方法的基礎(chǔ)上根據(jù)不同情況選用恰當(dāng)?shù)姆椒,以滿足不同的要求。例如凱氏定氮法結(jié)果精確,但操作復(fù)雜,用于大批量樣品的測(cè)試則不太合適;Lowry法精確度較高,但是比較費(fèi)時(shí),且每步的時(shí)間要求相對(duì)嚴(yán)格;Bradford法靈敏簡(jiǎn)便,但易受去垢劑的影響;BCA法以其試劑穩(wěn)定,抗干擾能力強(qiáng),結(jié)果穩(wěn)定,靈敏度高而受歡迎。
5. UV吸收法:
原理:利用蛋白質(zhì)中的芳香族氨基酸(如酪氨酸、色氨酸)在280nm處的吸收峰,測(cè)定溶液中蛋白質(zhì)的含量。
優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)單,無需添加試劑;可同時(shí)測(cè)定多個(gè)樣品。
缺點(diǎn):靈敏度較低,只能檢測(cè)高濃度的蛋白質(zhì);對(duì)于某些蛋白質(zhì)(如酶)會(huì)產(chǎn)生干擾,導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。