1．試驗材料

(1)嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（也可用成套測試管）。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillus stearothermophilus)。

ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-105 CFU/片。

(2) 121℃壓力蒸氣滅菌化學(xué)指示卡（常見的滅菌指示帶也可）。

(3)溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基115℃高壓滅菌20分鐘后備用

(4)0-150℃留點溫度計（須計量局校準(zhǔn)）。

2．方法與結(jié)果

將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（以下簡稱菌片）用無菌鑷子放人密封試管中�；瘜W(xué)指示卡和留點溫度計放入敞口試管中。以上兩種試管各準(zhǔn)備5-10份。分別放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如滅菌器為二層，則需放10處。

留點溫度計標(biāo)化合格后方可用于驗證試驗。檢測前，需將溫度計的水銀柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測后留點溫度計的溫差應(yīng)在1℃之間，則說明滅菌器內(nèi)的溫度分布是均勻的。

滅菌后的菌片應(yīng)在嚴(yán)格無菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56-60℃培養(yǎng)24-48小時，觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)?/span>黃色，說明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活，細(xì)菌仍可在培養(yǎng)基中生長，分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色，則說明芽胞已滅活。同時要用未經(jīng)滅菌的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽性對照，不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對照。

化學(xué)指示卡上的指示色塊，在高壓蒸氣滅菌時，由淡黃色變?yōu)楹谏?/span>。隨著顏色變化的深淺，并與對照色相比，可判斷滅菌效果是否達(dá)到要求�；瘜W(xué)指示卡應(yīng)在干燥處保存。遇潮會變色，影響滅菌效果的觀測。

高壓蒸氣滅菌必須使蒸氣順利進(jìn)入滅菌器內(nèi)，與滅菌物品接觸，并將原有的冷空氣排出方可達(dá)到滅菌的效果。要進(jìn)行空載熱分布和滿載熱穿透力驗證(滿載時不超過總體積的2/3)。二種驗證各重復(fù)三次，共做六次。

5個點六次試驗表明溫度均在121℃，化學(xué)指示卡變黑；程度與對照色一致；培養(yǎng)基均未改變顏色，說明高壓蒸氣滅菌效果合格。

高壓滅菌器屬于強檢儀器，但強檢只是對儀器物理參數(shù)的考核。所以做過強檢的滅菌器還必須進(jìn)行滅菌效果的驗證。一些單位常常忽略了這個重要的問題。國內(nèi)市售的手提滅菌器，往往儀器指針達(dá)到所需的溫度，但滅菌物品的實際溫度卻未達(dá)到要求。導(dǎo)致滅菌物品不徹底，影響實驗結(jié)果。培養(yǎng)基滅菌不徹底，影響培養(yǎng)基的使用及結(jié)果判斷。因此高壓蒸氣滅菌器無菌效果的驗證是一個必須引起重視的問題。

附：滅菌時的注意事項（一些進(jìn)口的全自動滅菌鍋可不用考慮排氣）

使用高壓蒸氣滅菌器時，首先應(yīng)注意在開放蒸氣的同時，排除滅菌器內(nèi)的冷空氣。必須將器內(nèi)冷空氣全部排除后，才可關(guān)閉排氣孔。假如滅菌器內(nèi)仍存留有部分空氣時，則壓力表上雖已達(dá)到了某一壓力值，但器內(nèi)之溫度仍未達(dá)到相應(yīng)之度數(shù)。存留的空氣越多，則二者相差也越大，器內(nèi)溫度不足，滅菌則不徹底。（很多人在做發(fā)酵法培養(yǎng)基滅菌時會出現(xiàn)小導(dǎo)管中有氣泡，不妨也可以嘗試多排出滅菌器內(nèi)的冷空氣，有奇效哦）。