1．光敏生物素標(biāo)記核酸 目前使用的光標(biāo)生物素試劑有兩種：光生物素（乙酸鹽）和補(bǔ)骨脂素生物素。它們都是由一個(gè)光敏基團(tuán)、一個(gè)連接臂和一個(gè)生物素基團(tuán)組成。光生物素的餉艋?攀?N3，它在光作用下可與核酸中的堿基結(jié)合。補(bǔ)骨脂素生物素中的光敏基團(tuán)補(bǔ)骨脂素在光照（320～400μm）下，可與單鏈或雙鏈核酸發(fā)生反應(yīng)，反應(yīng)主要在T上，C上也有一定程度的反應(yīng)。光敏生物素的連接臂含6～12個(gè)碳原子，用以減少探針雜交時(shí)的空間位阻。光敏生物素標(biāo)記核酸，方法簡(jiǎn)單，靈敏度也可達(dá)到pg水平，可用于外源基因的檢測(cè)。最近出現(xiàn)了一種新的光敏活性DNA生物素試劑，即生物素-聚乙二醇-當(dāng)歸素（BPA）。BPA的DNA結(jié)合部分是一個(gè)活性糖香豆素衍生物，在長(zhǎng)波UV下它可與DNA堿基共價(jià)鍵結(jié)合。BPA反應(yīng)物與DNA結(jié)合比光敏生物素更特異，在可見(jiàn)光下它不與核酸反應(yīng)，這個(gè)特性可使BPA只標(biāo)記粗制細(xì)胞裂解物中的核酸，而不標(biāo)記蛋白、多糖和其他細(xì)胞大分子。
2．酶促生物素標(biāo)記核酸 以生物素化的脫氧核苷三磷酸（Bio-11-dUTP,Bio –7 – dATP、Bio-11-dCTP）等代替相應(yīng)32P標(biāo)記的脫氧核苷三磷酸，經(jīng)DNA聚合酶作用摻入DNA。Bio-dUTP代替dTTP,Bio-dATP代替dATP，Bio- dCTP代替dCTP。Bio –11-dUTP的11是指生物素基團(tuán)與脫氧核苷酸之間連接臂的碳鏈長(zhǎng)度。常用的酶促生物素標(biāo)記DNA的方法有缺口平移法和隨機(jī)引物延伸法。
3．寡核苷酸的生物素末端標(biāo)記 有5’-磷酸的化學(xué)標(biāo)記法和3’-OH的酶促標(biāo)記法。前者將寡核苷酸的5’-磷酸接上一個(gè)乙二胺，然后用琥珀酰亞胺生物素，將生物素基團(tuán)連接在磷酸酰胺基上。后者是用末端轉(zhuǎn)移將Bio-11–dUTP加于其3’-OH端（脫去一個(gè)焦磷酸）。
4．酶標(biāo)DNA 標(biāo)記試劑是辣根過(guò)氧化酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）。通過(guò)對(duì)苯醌（PBQ）與聚乙烯亞胺（PEI）連接而成（HRP-PBQ-PEI ），此試劑在戊二醛的作用下與變性的DNA結(jié)合，使HRP與DNA連接在一起，組成HRP標(biāo)記的DNA探針。
5．酶標(biāo)寡核苷酸 包括核苷酸5’末端標(biāo)記HRP法和內(nèi)部標(biāo)記AP法。前者是在HRP中產(chǎn)生一個(gè)-HS反應(yīng)基團(tuán)，在寡核苷酸合成終了加在5’端，帶一個(gè)C6的-HS基，與活化的HRP反應(yīng)生成5’-HRP寡核苷酸。后者是在全成寡核苷酸過(guò)程中將一個(gè)5’帶連接臂及CF3基團(tuán)的尿苷3’亞磷酰亞胺合成在寡核苷酸鏈中，合成后此活化的寡核苷酸與AP反應(yīng)即得到AP標(biāo)記的寡核苷酸。
6．DNA半抗原標(biāo)記 其原理與Bio-11-dTUP相同，只是用毛地黃甙代替生物素形成Dig –11- dUTP，酶促摻入DNA分子。用抗毛地黃甙抗體檢測(cè)標(biāo)記在DNA上的半抗原分子Digoxigenin
