基因診斷是以核酸分子雜交技術(shù)為基礎(chǔ)，在核酸水平檢測(cè)人類遺傳性疾病的基因缺陷和一些傳染病病原體的方法。其基本過程是：制備DNA探針，標(biāo)記探針，檢測(cè)樣本。開展這項(xiàng)工作的關(guān)鍵是要得到高靈敏度、高特異性的探針。以往人們是用放射性同位素來標(biāo)記探針DNA。近年來，非同位素標(biāo)記方法發(fā)展很快，已有取代同位素標(biāo)記法的趨勢(shì)。地高辛配基隨機(jī)標(biāo)記DNA探針法，是較為成功的一種非同位素標(biāo)記方法。其原理是：用化學(xué)方法把類固醇類半抗原地高辛分子連接在dUTP上（Dig-dUTP）。用隨機(jī)引物及DNA多聚酶，以探針DNA為模板，合成互補(bǔ)DNA，化學(xué)修飾過的dUTP同時(shí)摻入到標(biāo)記的DNA探針中。雜交后用堿性磷酸酶標(biāo)記的抗地高辛單抗與標(biāo)記探針DNA中的Dig-dUTP結(jié)合，加入顯色底物，在堿性磷酸酶作用下，轉(zhuǎn)變成深棕色或藍(lán)色的化合物。
1．標(biāo)記 本試劑盒采用隨機(jī)引物標(biāo)記方法，可標(biāo)記少至10ng，多至3μg的DNA。能在新合成的DNA鏈每20～25個(gè)核苷酸，摻入一個(gè)Dig-dUTP，反應(yīng)時(shí)間約為1h。
2．雜交 按標(biāo)準(zhǔn)雜交方法進(jìn)行�？梢圆捎媚猃埬せ蛳跛崂w維素膜。用過的雜交液可凍存于-20℃，重復(fù)使用。
3．免疫學(xué)檢測(cè) 封阻后，檢測(cè)反應(yīng)的第一步，抗體結(jié)合物與標(biāo)記DNA結(jié)合，出現(xiàn)雜交的半抗原-標(biāo)記DNA，顯色反應(yīng)起始是在堿性pH條件下加入無色的顯色劑X-磷酸鹽和NBT，在幾分鐘內(nèi)便開始出現(xiàn)藍(lán)色，顯色反應(yīng)的過程持續(xù)3d。典型的例子是在24h后終止顯色反應(yīng)。用二甲基甲酰胺洗掉尼龍膜上的顏色后，尼龍膜可重新用于雜交。
4．應(yīng)用 地高辛配基標(biāo)記DNA探針及檢測(cè)試劑盒，能檢測(cè)0.1pg的同源DNA，能檢測(cè)1μg哺乳動(dòng)物DAN中的單拷貝基因，與放射性標(biāo)記系統(tǒng)比較，此試劑盒能快速得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果（從DNA的標(biāo)記和雜交至見到檢測(cè)結(jié)果24h內(nèi)能完成），而且消除了放射性的不安全問題。這試劑的靈敏度與特異性使它適用于所有的雜交技術(shù)（包括DNA-印跡轉(zhuǎn)移，菌落雜交，噬菌斑雜交及原位雜交）以替代同位素標(biāo)記和放射自顯影術(shù)。
