1．枸櫞酸三鈉還原法
（1）10nm膠體金粒的制備：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加入1％枸櫞酸三鈉水溶液3ml，加熱煮沸30min，冷卻至4℃，溶液呈紅色。
（2）15nm膠體金顆粒的制備：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加入1％枸櫞酸三鈉水溶液2ml，加熱煮沸15min～30min，直至顏色變紅。冷卻后加入0.1Mol/L K2CO30.5ml，混勻即可。
（3）15nm、18nm～20nm、30nm或50nm膠體金顆粒的制備：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加熱煮沸。根據(jù)需要迅速加入1％枸櫞酸三鈉水溶液4ml、2.5ml、1ml或0.75ml，繼續(xù)煮沸約5min，出現(xiàn)橙紅色。這樣制成的膠體金顆粒則分別為15nm、18～20nm、30nm和50nm。
2．鞣酸—枸櫞酸鈉還原法
A液：1％HAuCl4水溶液1ml加入79ml雙餾水中混勻。
B液：1％枸櫞酸三鈉4ml，1％鞣酸0.7ml，0.1Mol/L K2CO3液0.2ml，混合，加入雙餾水至20ml。
將A液、B液分別加熱至60℃，在電磁攪拌下迅速將B液加入A液中，溶液變藍(lán)，繼續(xù)加熱攪拌至溶液變成亮紅色。此法制得的金顆粒的直徑為5nm。如需要制備其它直徑的金顆粒，則按下表所列的數(shù)字調(diào)整鞣酸及K2CO3的用量。
鞣酸—枸櫞酸鈉還原法試劑配制表
|
金粒直徑
（nm）
|
A液
|
B液
|
||||
|
1％HAuCl4
|
雙餾水
|
1％枸櫞酸三鈉
|
0.1Mol/L K2CO3
|
1％鞣酸
|
雙餾水
|
|
|
5
|
1
|
79
|
4
|
0.20
|
0.70
|
15.10
|
|
10
|
1
|
79
|
4
|
0.025
|
0.10
|
15.875
|
|
15
|
1
|
79
|
4
|
0.0025
|
0.01
|
15.9875
|
3．制備高質(zhì)量
膠體金的注意事項(xiàng)
（1）玻璃器皿必須徹底清洗，最好是經(jīng)過(guò)硅化處理的玻璃器皿，或用第一次配制的膠體金穩(wěn)定的玻璃器皿，再用雙餾水沖洗后使用。否則影響生物大分子與金顆粒結(jié)合和活化后金顆粒的穩(wěn)定性，不能獲得預(yù)期大小的金顆粒。
（2）試劑配制必須保持嚴(yán)格的純凈，所有試劑都必須使用雙餾水或三餾水并去離子后配制，或者在臨用前將配好的試劑經(jīng)超濾或微孔濾膜（0.45µm）過(guò)濾，以除去其中的聚合物和其它可能混入的雜質(zhì)。
（3）配制膠體金溶液的pH以中性（pH7.2）較好。
（4）氯金酸的質(zhì)量要求上乘，雜質(zhì)少。最好是進(jìn)口的。
（5）氯金酸配成1％水溶液在4℃可保持?jǐn)?shù)月穩(wěn)定，由于氯金酸易潮解，因此在配制時(shí)，最好將整個(gè)小包裝一次性溶解。
