ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。
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操作步驟
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可能原因
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解決辦法
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選擇試劑
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選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
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加 樣
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1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；
2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)； 3.加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。 |
1.標(biāo)本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2.加樣后及時放入孵箱。 3.加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。 4.如果采用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5.標(biāo)本較多時，請分批操作。 |
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孵 育
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1.孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；
2.孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底。 |
1.貼封片或加蓋；
2.按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。 |
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洗 板
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1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2.采用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 3.反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 |
1.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后最好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
2.合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。 |
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顯 色
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1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；
2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。 |
1. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；
2. 加樣時保持顯色劑不外流； 3.A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。 |
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終 止
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加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。
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加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
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讀 板
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讀板時板底不清潔。
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應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
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全過程
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1.整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸;
2.實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。 |
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在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量�，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。