Ｔ４噬菌體ＤＮＡ連接酶不同于大腸桿菌ＤＮＡ連接酶，它可以催化平端ＤＮＡ片段的連接（Sgaramella和Khorana,1972;Sgaramella和Ehrlich,1978），由于ＤＮＡ很容易成為平端，所以這是一個極為有用的酶學(xué)物性。有了這樣的物性，才能使任何ＤＮＡ分子彼此相連。然而，相對而言，平端連接是低效反應(yīng)，它要求以下４個條件：
１）低濃度（0.5mmol/L）的ATP(Ferretti和Sgaranekka,1981）。
２）不存在亞精胺一類的多胺。
３）極高濃度的連接酶（50Weiss單位．ml）。
４）高濃度的平端。
１．凝聚劑
在反應(yīng)混合物中加入一些可促進大分子群聚作用并可導(dǎo)致ＤＮＡ分子凝聚成集體的物質(zhì)，如聚乙二醇（Pheiffer和Zimmerman,1983;Zimmerman和Pheiffer,1983;ZimmermanT Ｈarrison,1985)或氯化六氨全高鈷（Rusche和Howard-Flanders,1985）,可以使如何取得適當(dāng)濃度的平端ＤＮＡ的總是迎刃而解。在連接反應(yīng)中，這些物質(zhì)具有兩作用：
１）它們可使平端ＤＮＡ的連接速率加大１－３個數(shù)量級，因此可使連接反應(yīng)在酶ＤＮＡ濃度不高的條件下進行。
２）它們可以改變連接產(chǎn)物的分布，分子內(nèi)連接受到抑制，所形成的連接產(chǎn)物一律是分子間連接的產(chǎn)物。這樣，即使在有利于自身環(huán)化（j:i=10）的ＤＮＡ濃度下，所有的ＤＮＡ產(chǎn)物也將是線狀多聚體。\par 在設(shè)立含凝聚劑的連接反應(yīng)時，下列資料可供參考。
（１）聚乙二醇（PEG8000）
１）用去離子水配制的ＰＥＧ8000貯存液（40％）分裝成小份，冰凍保存，但加入連接反應(yīng)混合物之前應(yīng)將其融化并使其達(dá)到室溫。在含15％PEG 8000的連接反應(yīng)混合物中，對連接反刺激效應(yīng)最為顯著。除PEG 800和Ｔ４噬菌體ＤＮＡ連接酶以外，其他所有連接混合物的組分應(yīng)于０℃混合，然后加適當(dāng)體積的PEG 8000（處于室溫），混勻，加酶后于20℃進行溫育。
２）連接混合物中含0.5mmol/L ATP和5mmol/L MgCl2時對連接反應(yīng)的刺激效應(yīng)最為顯著，甚至ATP濃度略有增加或ＭgCl2濃度略有降低，都會嚴(yán)重降低刺激的強度（Pheiffer和Zimmerman,1983）。
３）濃度為15％的PEG 8000可刺激帶粘端的ＤＮＡ分子的連接效率提高至原來的10-100倍，反應(yīng)的主產(chǎn)物是串聯(lián)的多聯(lián)體。
４）PEG 8000可刺激短至８個核苷酸的合成寡聚物的平端連接，在這一方面，它與氯化六氨合高鈷有所不同。
（２）氯化六氨合高鈷
１）氯化六氨合高鈷可用水配成10mmol/L貯存液貯存于-20℃，它對連接反應(yīng)的刺激具有高度的濃度信賴性。當(dāng)連接反應(yīng)混合物中鹽深度為1.0-1.5μmol/L時，其刺激作用最大。氯化六氨合高鈷可使平端連接的效率大約提高到原來的50W部，但只能使端連接的效率提高到原來的５倍（Rusche和Howard-Flanders,1985）。
２）在單價陽離子（30mmol/L KCl）存在下，它對平端連接仍有一定的刺激作用，但此時連接產(chǎn)物的分布有所改變。連接產(chǎn)物不再是清一色的分子間連接產(chǎn)物，相反，環(huán)狀ＤＮＡ將點盡優(yōu)勢。
３）與ＰＥＧ 8000不同，氯化六氨合高鈷不能顯著提高合成寡核苷酸的連接速率。
１）低濃度（0.5mmol/L）的ATP(Ferretti和Sgaranekka,1981）。
２）不存在亞精胺一類的多胺。
３）極高濃度的連接酶（50Weiss單位．ml）。
４）高濃度的平端。
１．凝聚劑
在反應(yīng)混合物中加入一些可促進大分子群聚作用并可導(dǎo)致ＤＮＡ分子凝聚成集體的物質(zhì)，如聚乙二醇（Pheiffer和Zimmerman,1983;Zimmerman和Pheiffer,1983;ZimmermanT Ｈarrison,1985)或氯化六氨全高鈷（Rusche和Howard-Flanders,1985）,可以使如何取得適當(dāng)濃度的平端ＤＮＡ的總是迎刃而解。在連接反應(yīng)中，這些物質(zhì)具有兩作用：
１）它們可使平端ＤＮＡ的連接速率加大１－３個數(shù)量級，因此可使連接反應(yīng)在酶ＤＮＡ濃度不高的條件下進行。
２）它們可以改變連接產(chǎn)物的分布，分子內(nèi)連接受到抑制，所形成的連接產(chǎn)物一律是分子間連接的產(chǎn)物。這樣，即使在有利于自身環(huán)化（j:i=10）的ＤＮＡ濃度下，所有的ＤＮＡ產(chǎn)物也將是線狀多聚體。\par 在設(shè)立含凝聚劑的連接反應(yīng)時，下列資料可供參考。
（１）聚乙二醇（PEG8000）
１）用去離子水配制的ＰＥＧ8000貯存液（40％）分裝成小份，冰凍保存，但加入連接反應(yīng)混合物之前應(yīng)將其融化并使其達(dá)到室溫。在含15％PEG 8000的連接反應(yīng)混合物中，對連接反刺激效應(yīng)最為顯著。除PEG 800和Ｔ４噬菌體ＤＮＡ連接酶以外，其他所有連接混合物的組分應(yīng)于０℃混合，然后加適當(dāng)體積的PEG 8000（處于室溫），混勻，加酶后于20℃進行溫育。
２）連接混合物中含0.5mmol/L ATP和5mmol/L MgCl2時對連接反應(yīng)的刺激效應(yīng)最為顯著，甚至ATP濃度略有增加或ＭgCl2濃度略有降低，都會嚴(yán)重降低刺激的強度（Pheiffer和Zimmerman,1983）。
３）濃度為15％的PEG 8000可刺激帶粘端的ＤＮＡ分子的連接效率提高至原來的10-100倍，反應(yīng)的主產(chǎn)物是串聯(lián)的多聯(lián)體。
４）PEG 8000可刺激短至８個核苷酸的合成寡聚物的平端連接，在這一方面，它與氯化六氨合高鈷有所不同。
（２）氯化六氨合高鈷
１）氯化六氨合高鈷可用水配成10mmol/L貯存液貯存于-20℃，它對連接反應(yīng)的刺激具有高度的濃度信賴性。當(dāng)連接反應(yīng)混合物中鹽深度為1.0-1.5μmol/L時，其刺激作用最大。氯化六氨合高鈷可使平端連接的效率大約提高到原來的50W部，但只能使端連接的效率提高到原來的５倍（Rusche和Howard-Flanders,1985）。
２）在單價陽離子（30mmol/L KCl）存在下，它對平端連接仍有一定的刺激作用，但此時連接產(chǎn)物的分布有所改變。連接產(chǎn)物不再是清一色的分子間連接產(chǎn)物，相反，環(huán)狀ＤＮＡ將點盡優(yōu)勢。
３）與ＰＥＧ 8000不同，氯化六氨合高鈷不能顯著提高合成寡核苷酸的連接速率。
