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3M大腸菌群快速檢驗(yàn)測(cè)試片操作以及判讀 |
| 一、測(cè)試大腸菌群 操作方法 |
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 1. 未開(kāi)封時(shí)，冷藏于≤8℃（≤46℉），并在保存期內(nèi)用完，高溫度時(shí)，凝固水可以排除，包裝物最好于室溫啟開(kāi)。 |
 2. 已開(kāi)封的，將封口以膠帶封緊。 |
 3. 已啟開(kāi)的包裝袋不要冷藏并于一個(gè)月內(nèi)使用完。 |
 4. 制備食物樣品稀釋液，稱取或吸取食物樣品，置入適宜的無(wú)菌容器內(nèi)，如均質(zhì)袋、稀釋瓶、WhirlPak bag或者其他滅菌容器內(nèi). |
 5. 加入適量的無(wú)菌稀釋液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4調(diào)PH7.2) 、0.1%的旦白膠水(ISO方法6887) 、緩沖旦白膠水(ISO方法6579) 、鹽溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸餾水. 但不可用含有枸櫞酸鹽、bisulfite or thiosulfate的緩沖液. 因?yàn)樗芤种咕L(zhǎng)。 |
 6、攪拌或均質(zhì)樣品.
樣品的稀釋液調(diào)PH6.6-7.2對(duì)酸性樣用IN NaOH、堿性樣用INHCI調(diào)PH。
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 7、將測(cè)試片置于平坦表面處，揭開(kāi)上層膜。 |
 8、使用吸管將1ml樣液垂直滴加在測(cè)試片的中央處。 |
 9、細(xì)心將上層膜緩慢蓋下，避免有氣光泡產(chǎn)生，切勿使上層膜直接落下。 |
 10、使用壓板（平面底朝下）放置在上層膜中央處。 |
 11、輕輕的壓下，使樣液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)面積上，切勿扭轉(zhuǎn)壓板。 |
 12、拿起壓板，靜置至少1分鐘以使培養(yǎng)基凝固。 |
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 14、可目視及用標(biāo)準(zhǔn)菌落計(jì)數(shù)器或其它的照明放大鏡計(jì)數(shù)，并可參考判讀卡計(jì)算菌落數(shù)。
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 15、可以分離菌落作進(jìn)一步鑒定，即掀起上層膜，由培養(yǎng)膠上挑取單個(gè)菌落。 |
 13、測(cè)試片的透明面朝上，可堆疊至20片。培養(yǎng)時(shí)間和溫度因方法而有不同，最通用的認(rèn)可方法是：
總大腸菌群
● AOAC官方方法986.33和989.10（乳/生乳和其它乳制品）
大腸菌群：32℃±1℃培養(yǎng)24±2h
● AOAC官方方法991.14（食品類）
大腸菌群：35℃±1℃培養(yǎng)24±2h
● NMKL方法（147.1993）
大腸菌群：37℃±1℃培養(yǎng)24±2h
● AFNOR認(rèn)可方法3M 01/2-09/89A和B（除水生貝殼類動(dòng)物外的所有食品）
大腸菌群：30℃±1℃培養(yǎng)24±2h
耐熱的（糞）大腸菌群
● AFNOR認(rèn)可方法，3M 01/2-09/89C（所有食品） 44℃±1℃培養(yǎng)24±2h。當(dāng)提高培養(yǎng)溫度時(shí)，培養(yǎng)箱應(yīng)有一定的濕度是需要的。 |
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| 二、測(cè)試大腸菌群 判讀方法 |
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Petrifilm ColiformTM Coliform測(cè)試片含有VRB培養(yǎng)劑 (Violet Red Bile)，一種冷水可溶性的凝膠劑和四唑翁(tetrazollium)指示劑，可增強(qiáng)菌落計(jì)數(shù)效果。表面覆蓋的膠膜，可留住發(fā)酵乳糖的大腸菌群產(chǎn)生的氣體。
AOAC和FDA細(xì)菌學(xué)分析手冊(cè)（RAM）規(guī)定大腸菌群為革蘭氏陰性桿菌，發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣。大腸菌群菌落在Petrifilm CC測(cè)試片上生長(zhǎng)產(chǎn)酸，PH指示劑使培養(yǎng)基顏色變深，在紅色菌落周?chē)袣馀菡�，為大腸菌群細(xì)菌。
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 大腸菌群簽定,在不同國(guó)家可以有變更
(見(jiàn)培養(yǎng)時(shí)間和溫度部分提示).
AOAC確認(rèn)的方法:
Total coliform= 69 (有氣泡的菌落) |
 No growth=0
注意圖2到圖5培養(yǎng)基顏色的變化,隨著coliform 菌數(shù)增多,培養(yǎng)基顏色變深,背景的泡(沫)
為培養(yǎng)基現(xiàn)象,不是大腸菌群生長(zhǎng)結(jié)果. |
 Total coliform count=79
Petrifilm cc 測(cè)試片菌落數(shù)適宜記數(shù)范圍是15-150,不要計(jì)算圓型培基外的菌落,因?yàn)榕菝奚弦巡缓x擇性培養(yǎng)基.見(jiàn)圓圈1 |
 Estimated total coliform count=220
測(cè)試片面積約為20cm2,當(dāng)菌落數(shù)超過(guò)150個(gè),為了估計(jì)菌落數(shù)可選擇其中一個(gè)或數(shù)個(gè)有代表性菌落的小方格(1cm2)計(jì)算平均菌落數(shù),在乘以20方向得到整個(gè)測(cè)試片上的菌落數(shù).
菌落太多時(shí)需進(jìn)一步稀釋樣品,方能獲得準(zhǔn)確計(jì)數(shù). |
 TNTC(菌數(shù)太多無(wú)法計(jì)數(shù))
Petrifilmcc測(cè)試片菌落無(wú)法計(jì)數(shù)時(shí)至少有下列現(xiàn)象之一.(1)很多小菌落(2)有許多氣泡(3)培養(yǎng)的顏色深暗. |
 Acrual coun=4
當(dāng)有大量的非大腸菌群細(xì)菌如假單胞菌屬細(xì)菌存在時(shí),Petrifilmcc測(cè)試片培養(yǎng)基顏色呈黃色. |
 Total coliform count=2
食物顆粒為不規(guī)規(guī)則形狀,且不帶氣泡. |
 Total coliform count=8
氣泡可有不同形狀,氣泡可使菌落撐散,使菌落輪廓似氣泡,見(jiàn)圓圈1和2,人為的氣泡可能是不當(dāng)?shù)牟僮魉?或是來(lái)自樣品捏的氣體,他們成不規(guī)則形狀,且不與菌落相連接.見(jiàn)圓圈3. |
 例如,1-10示為不同類型氣泡與菌落的連接情況,所有菌落應(yīng)計(jì)數(shù). |
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發(fā)布日期：2006-05-15
